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davedylan
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3 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2016 : 12:14:54  Mostra Profilo Invia a davedylan un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,
Qualcuno saprebbe spiegarmi come si fa a capire se un vettore(la sequenza di interesse) è collocato nel plasmide in senso o antisenso? quel che non riesco a capire è come sia possibile inserire il vettore in entrambe le direzioni, da cosa è dovuta questa differenza?
Grazie

Claudio24
Nuovo Arrivato



5 Messaggi

Inserito il - 11 febbraio 2016 : 19:17:16  Mostra Profilo Invia a Claudio24 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scritto da MolecularLab Mobile

Ciao senti di solito , il concetto di senso/ antisenso dipende da come avviene la trascrizione ...per cui da come la tua sequenza viene trascritta se 5' 3' è di senso , altrimenti mangiando 3' 5'
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 12 febbraio 2016 : 12:03:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da davedylan

Ciao a tutti,
Qualcuno saprebbe spiegarmi come si fa a capire se un vettore(la sequenza di interesse) è collocato nel plasmide in senso o antisenso? quel che non riesco a capire è come sia possibile inserire il vettore in entrambe le direzioni, da cosa è dovuta questa differenza?
Grazie


Innanzitutto il "vettore" non è la sequenza di interesse, ma è il plasmide!
plasmide = vettore
Non è vero però il contrario perchè ci sono anche vettori non plasmidici.
Non inserisci un "vettore" in un plasmide, ma inserisci una sequenza, un frammento che viene comunemente chiamato "inserto".
Ora, l'inserto si può inserire in due direzioni senso o antisenso, questo avviene quando fai un clonaggio blunt, ovvero con estremità piatte, il frammento può legarsi normale o capovolto perchè le due estremità sono uguali.
Se invece fai un clonaggio sticky (con estremità "coesive" o "appiccicose"), eviti questo perchè il frammento si può inserire in una sola direzione.
<se cerchi in google trovi diverse immagini.
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fabricas
Nuovo Arrivato



3 Messaggi

Inserito il - 26 febbraio 2017 : 18:02:57  Mostra Profilo Invia a fabricas un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scritto da MolecularLab Mobile

Ma per verificare l'orientamento dell'inserto posso solo fare un sequenziamento End o c'è qualche metodo più rapido?
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