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Saaz18
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Inserito il - 14 ottobre 2018 : 20:12:06  Mostra Profilo Invia a Saaz18 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao

Partendo da un mRNA dovrei ottenere un RNA senso ed un RNA antisenso. A detta del prof dovrei disegnare 4 primer per 2 PCR per inserire i promotori della RNApol virale (T3 e T7, ad esempio). Grossomodo mi torna tutto il procedimento, ma non capisco perche' mi servirebbe fare 2 PCR ed utilizzare 4 Primer.

Il modo che ho seguito io per farlo e' questo:

1) Retrotrascrivo l'mRNA e faccio PCR utilizzando 2 primer. A ciascun primer addizione la sequenza complementare di uno dei due promotori virali (es: Rev+complementareT3; For+complementareT7). Il prodotto di questa PCR dovrebbe essere un dsDNA in cui ogni filamento contiene un promotore virale posizionato nella giusta direzione.

2)Faccio due reazioni, una con RNApol T7 e l'altra con RNApol T3, e ottengo i due RNA, uno senso e l'altro antisenso.

Sbaglio da qualche parte?
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