Espressione di proteina batterica da 8kDa

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Mat
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85 Messaggi

Inserito il - 13 giugno 2009 : 12:52:03

Salve a tutti, ho un problema che descrivo: ho da analizzare una proteina maturasi batterica da circa 8 kDa solubile, l'ho espressa in E. coli usando pET inducendo con IPTG, analizzando le cellule dopo 1h e 3h di induzione e facendo un SDS-PAGE colorando con blu di Comassie ed � venuto fuori che � stata indotta una proteina dal peso di circa 16 kDa ed � concentrata principalmente nel pellet mentre nel surnatante la banda (quella da 16 kDa) era praticamente invisibile. Abbiamo notato anche che all'altezza del peso di 8 kDa non si notano differenze fra non indotto e indotto. Per sicurezza abbiamo mandato a sequenziare il frammento clonato ed � corretto. Qualcuno ha qualche idea sul perch� potrebbe essere venuto fuori questo risultato?

angemore
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82 Messaggi

Inserito il - 14 giugno 2009 : 20:34:52

Perch� non provi a fare un western per verificare se la proteina di 16kDa non sia altro che il dimero della proteina di tuo interesse (se viene riconosciuta dall'anticorpo allora � cos�). In questo caso � possibile che si abbia cos� tanta induzione che la proteina tende a dimerizzare e a finire nei corpi di inclusione (ecco perch� poi la ritrovi nel pellet).