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 Analisi dei dati Real-Time con Taq-Man
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7a
Nuovo Arrivato



2 Messaggi

Inserito il - 06 agosto 2009 : 15:57:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 7a Invia a 7a un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti, mi sono appena iscritta al forum e vorrei una mano per riuscire a completare l'analisi dei dati della Real-Time.
Per i miei esperimenti con Taq-Man probe ho fatto 4 replicati coamplificando il gene target con l' RNAsi P (come suggerito dall' applied biosystems). Ho calcolato il numero di copie del gene target con il metodo DDct, ma non riesco a capire quale parametro devo utilizzare per essere sicura che tutti e 4 i miei replicati siano attendibili!!
C'è qualcuno che fa questo tipo di studi e può darmi una mano???
grazie mille!!!!!!!!

miky76
Utente Junior



126 Messaggi

Inserito il - 07 agosto 2009 : 16:00:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di miky76 Invia a miky76 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao

premesso che io uso syber green

non capisco la tua domanda

per DDct intenti il metodo delta ct?

se si.... allora hai il tuo ct per ogni copia e come hai gia detto hai calcolato il numero di copie del gene target

quindi hai tutti i dati che ti servono

che intendi per attendibilita' dei replicati?
se puoi usare tutte e 4 o se devi scartare dalla analisi uno o piu di uno?

se la risposta e' si
e' facile.... devi vedere la deviazione standar della media dei tuoi replicati
se hai una deviazione standar superiora a 0.4
di solito devi scartare il replicato che ti alza la deviazione

esampio

hai 4 replicati con ct uguale a
27,4
27,9
27,3
28,5

sicuro che la deviazione standard della media e' superiora 0.4

quindi scarti quello che non e' attendibile
che in questo caso e' 28,5
e ricalcoli il tu Ct medio
e usi questo per il metodo del delta ct

spero che ho risposto alla tua domanda
se no riformula


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7a
Nuovo Arrivato



2 Messaggi

Inserito il - 07 agosto 2009 : 20:55:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 7a Invia a 7a un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si..grazie!! avevo bisogno di confrontarmi con qualcun altro..tra deviazione standard e CV non ne uscivo!!
buone vacanze!!
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