Ciao a tutti, mi sono appena iscritta al forum e vorrei una mano per riuscire a completare l'analisi dei dati della Real-Time. Per i miei esperimenti con Taq-Man probe ho fatto 4 replicati coamplificando il gene target con l' RNAsi P (come suggerito dall' applied biosystems). Ho calcolato il numero di copie del gene target con il metodo DDct, ma non riesco a capire quale parametro devo utilizzare per essere sicura che tutti e 4 i miei replicati siano attendibili!! C'è qualcuno che fa questo tipo di studi e può darmi una mano??? grazie mille!!!!!!!!
se si.... allora hai il tuo ct per ogni copia e come hai gia detto hai calcolato il numero di copie del gene target
quindi hai tutti i dati che ti servono
che intendi per attendibilita' dei replicati? se puoi usare tutte e 4 o se devi scartare dalla analisi uno o piu di uno?
se la risposta e' si e' facile.... devi vedere la deviazione standar della media dei tuoi replicati se hai una deviazione standar superiora a 0.4 di solito devi scartare il replicato che ti alza la deviazione
esampio
hai 4 replicati con ct uguale a 27,4 27,9 27,3 28,5
sicuro che la deviazione standard della media e' superiora 0.4
quindi scarti quello che non e' attendibile che in questo caso e' 28,5 e ricalcoli il tu Ct medio e usi questo per il metodo del delta ct
spero che ho risposto alla tua domanda se no riformula