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Autore

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giulella
Nuovo Arrivato

38 Messaggi

Inserito il - 26 febbraio 2010 : 11:09:01

Ciao a tutti!

Qualcuno sa dirmi come posso rimuovere la contaminazione genomica dall'RNA? Ho fatto l'estrazione con il Trizol e trattamento con Dnasi, ma purtroppo ottengo delle bande dopo aver fatto una PCR sull'RNA

Come potrei recuperare il mio RNA? Ripetendo il trattamento con la Dnasi?

Grazie a tutti

michy2
Nuovo Arrivato

44 Messaggi

Inserito il - 26 febbraio 2010 : 11:35:23

puoi provare con un kit di purificazione dell'Rna...

cami
Utente Junior

Citt�: roma

136 Messaggi

Inserito il - 26 febbraio 2010 : 11:38:16

io ti consiglierei di controllare bene i reagenti che usi... in genere � raro che il trattamento con la DNAsi non funzioni (immagini che tu stia utilizzando i kit invitrogen o promega), per cui prima di ripeterlo mi toglierei il dubbio che non ci sia un problema nella retrotrascrizione o nella PCR (ammesso che tu non l'abbia gi� fatto..). io sto dando per scontato che "PCR sull'RNA" significhi che hai fatto l'RT sull'RNA e poi la PCR per il gene, o il normalizzatore.. i controlli negativi come ti sono venuti?
un altra opzione � che tu non veda un amplicone, ma un dimero di primer, a volte capita che si veda questa banda nei controlli negativi, e se il tuo amplicone � di dimensioni molto piccole (dalle 100bp in gi�), l'altezza della banda pu� essere circa la stessa, se il gel ha corso poco... se questo � il caso, ti consiglierei di far correre di pi� il tuo gel, in modo da separare bene le bande nel caso non si trovino alla stessa altezza. se invece sono proprio uguali allora avrai una contaminazione (vedi sopra)...
buona fortuna!