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 Estrazione DNA da sangue intero
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patty82
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31 Messaggi

Inserito il - 08 aprile 2010 : 14:37:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di patty82 Invia a patty82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi mi sono appena iscritta al vostro bellissimo sito....avrei bisogno di un aiuto: dovrei estrarre del DNA da sangue intero, o meglio in realtà quando mi arriva la provetta del prelievo, aliquoto il plasma e poi i buffy coat, ma mi rimangono sempre un bel po' di globuli rossi insieme ai bianchi....quindi ho bene pensato (almeno spero) che vada trattato come sangue intero. Ho provato con il DNAzol, ma non riesco ad estrarre niente. Credo che il problema sia dato dal fatto che parto da poche cellule e il DNAzol non è il metodo migliore per estrarre il DNA da così poche cellule (da protocollo si richiede di avere almeno 10.000.000 di cellule di partenza, che io non credo di avere. Sapete consigliarmi un metodo più appropriato oppure un kit adatto per estrarre il DNA in queste condizioni?

GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 08 aprile 2010 : 16:35:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Hai provato ad utilizzare la funzione cerca del forum? Ci sono varie discussioni in proposito.

Comunque visto che ultimamente sono in molti a chiederlo ho appena inserito un protocollo: http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=73

oppure come ho consigliato ad un altro utente puoi guardare anche questi: http://www.protocol-online.org/prot/Molecular_Biology/DNA/DNA_Extraction___Purification/DNA_Extraction_from_Blood/index.html
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beppe.cib
Nuovo Arrivato



41 Messaggi

Inserito il - 08 aprile 2010 : 17:23:02  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di beppe.cib Invia a beppe.cib un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Funziona anche su sangue intero congelato?
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 08 aprile 2010 : 17:32:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si beppe funziona anche su sangue congelato, come ti ho risposto anche nella tua discussione (il protocollo l'ho inserito dopo averti risposto, ma è sempre quello)
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patty82
Nuovo Arrivato



31 Messaggi

Inserito il - 09 aprile 2010 : 10:27:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di patty82 Invia a patty82 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grzie mille per il suggerimento...proverò!!!
Due domande:
- secondo te quel protocollo funziona anche su quantità molto più besse di sangue (per esempio partire da 0,2 al ma 0,4 ml)?
- il DNAzol non funziona perchè parto con una quantità di cellule troppo bassa?
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 09 aprile 2010 : 11:29:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In effetti il volume che hai è un po' pochino, il metodo è consigliato per 1-10ml di sangue intero, non ho mai provato ad utilizzarlo per volumi inferiori.
Altrimenti puoi vedere altre discussioni del forum (ce ne sono varie) o vedere tra gli altri protocolli che ti ho indicato.

Il DNAzol non l'ho mai utilizzato, potrebbe anche darsi che il problema sia la quantità.
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beppe.cib
Nuovo Arrivato



41 Messaggi

Inserito il - 22 aprile 2010 : 11:41:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di beppe.cib Invia a beppe.cib un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Due domande
1. Il tuo protocollo va bene anche con un volume di sangue iniziale compreso tra 1 e 2ml
2. la ricetta della Protein Precipitation Solution
Grazie
ciao
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beppe.cib
Nuovo Arrivato



41 Messaggi

Inserito il - 20 maggio 2010 : 12:05:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di beppe.cib Invia a beppe.cib un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sto usando questo protocollo per l'estrazione del DNA e funziona molto bene.
http://www.protocol-online.org/prot/Molecular_Biology/DNA/DNA_Extraction___Purification/DNA_Extraction_from_Blood/index.html

Ho un piccolo problema:
- alla fine non riesco a risospendere il DNA, forse per la grande quantità del prodotto, come posso fare?
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