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alarasth
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Inserito il - 30 maggio 2011 : 17:09:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di alarasth Invia a alarasth un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao! avrei bisogno di aiuto!
il mio tirocinio di laboratorio è consistito nel purificare e caratterizzare la fosfatasi alcalina di E.coli.
alla fine di tutti gli esperimenti devo ovviamente trarre delle conclusioni. ho una cosa che pero nn mi è molto chiara: ho effettuato la cromatografia per esclusione molecolare e la SDS-PAGE per determinare la massa molecolare relativa della mia proteina rispettivamente in condizioni native e denaturanti ottenendo questi risultati: Mr nativa: 44.000 Mr denaturata:48.000. in bibliografia è stato trovato un valore in SDS gel di 43.000 +/- 2000.
la mia domanda è: come posso commentare questi valori?? perchè la mia conclusione è stata molto semplicemente che i risultati sono piu o meno conformi ai dati della bibliografia, pero per la tesi questo non basta...per favore mi aiutate??????????? non riesco da sola a trarre delle conclusioni soddisfacenti :(

Martin.diagnostica
Utente Attivo

H. pylori



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Inserito il - 30 maggio 2011 : 17:14:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Martin.diagnostica Invia a Martin.diagnostica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da alarasth

ciao! avrei bisogno di aiuto!
il mio tirocinio di laboratorio è consistito nel purificare e caratterizzare la fosfatasi alcalina di E.coli.
alla fine di tutti gli esperimenti devo ovviamente trarre delle conclusioni. ho una cosa che pero nn mi è molto chiara: ho effettuato la cromatografia per esclusione molecolare e la SDS-PAGE per determinare la massa molecolare relativa della mia proteina rispettivamente in condizioni native e denaturanti ottenendo questi risultati: Mr nativa: 44.000 Mr denaturata:48.000. in bibliografia è stato trovato un valore in SDS gel di 43.000 +/- 2000.
la mia domanda è: come posso commentare questi valori?? perchè la mia conclusione è stata molto semplicemente che i risultati sono piu o meno conformi ai dati della bibliografia, pero per la tesi questo non basta...per favore mi aiutate??????????? non riesco da sola a trarre delle conclusioni soddisfacenti :(


44kd è in linea con 43 +/-2 kd non c'è molto da dire, ma 48? è forse una proteina dimerica? hai visto in letteratura?

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alarasth
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16 Messaggi

Inserito il - 30 maggio 2011 : 17:18:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di alarasth Invia a alarasth un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si!!! è una proteina dimerica...
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Martin.diagnostica
Utente Attivo

H. pylori



1582 Messaggi

Inserito il - 30 maggio 2011 : 17:25:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Martin.diagnostica Invia a Martin.diagnostica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Be allora una prima informazione è che c'è una subunità di 44 e una subunità di 4 :D

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alarasth
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16 Messaggi

Inserito il - 30 maggio 2011 : 17:35:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di alarasth Invia a alarasth un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
effettivamente sarebbe un'ottima conclusione..:D..il problema è che in bibliografia ogni subunità è indicata come circa 40.000....:/!! teoricamente quindi sarebbe stato piu corretto avere 80000 che 48000 giusto? ... quindi la conclusione più ovvia è che ho sbagliato l'esperimento??:(
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Martin.diagnostica
Utente Attivo

H. pylori



1582 Messaggi

Inserito il - 30 maggio 2011 : 18:42:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Martin.diagnostica Invia a Martin.diagnostica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
in effetti oppure potresti aver scoperto una nuova subunità ma meglio non essere troppo ottimisti.
Hai eseguito anche saggi di attività?

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alarasth
Nuovo Arrivato



16 Messaggi

Inserito il - 01 giugno 2011 : 16:09:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di alarasth Invia a alarasth un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
bè effettivamente hai ragione...meglio nn essere troppo ottimista...:)! si cmq ho fatto anche i saggi enzimatici.. sono arrivata alla conclusione che molto probabilmente la purificazione della proteina non è venuta in modo ottimale, come posso riscontare dal valore piuttosto basso del fattore di purificazione e della resa ottenuti in laboratorio rispetto ai dati bibliografici. penso quindi che sia possibile che oltre alla mia proteina mi sono tirata dentro altre sostanze, per questo ho un valore che mi indica la presenza di un'altra unità. secondo te è un ragionamento plausibile? :)
ps grazie mille di avermi aiutata!!:)
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Martin.diagnostica
Utente Attivo

H. pylori



1582 Messaggi

Inserito il - 01 giugno 2011 : 19:06:04  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Martin.diagnostica Invia a Martin.diagnostica un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da alarasth

bè effettivamente hai ragione...meglio nn essere troppo ottimista...:)! si cmq ho fatto anche i saggi enzimatici.. sono arrivata alla conclusione che molto probabilmente la purificazione della proteina non è venuta in modo ottimale, come posso riscontare dal valore piuttosto basso del fattore di purificazione e della resa ottenuti in laboratorio rispetto ai dati bibliografici. penso quindi che sia possibile che oltre alla mia proteina mi sono tirata dentro altre sostanze, per questo ho un valore che mi indica la presenza di un'altra unità. secondo te è un ragionamento plausibile? :)
ps grazie mille di avermi aiutata!!:)



Secondo me è un ottimo ragionamento speculativo :D

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alarasth
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16 Messaggi

Inserito il - 05 giugno 2011 : 11:53:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di alarasth Invia a alarasth un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ahahah....bè avrei preferito essere pragmatica piuttosto che speculativa effettivamente :D
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