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biotecnologa86
Utente Junior
165 Messaggi |
 Inserito il - 30 giugno 2011 : 21:45:58
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salve a tutti ...ho una domanda stupida ma che mi preoccupa, è banale, ma oggi il prof mi ha fatto venire dei dubbi, allora come posso preparare una gel di agarosio, conoscendo la percentuale che mi interessa, al 0.8% ed il volume 40 ml.con un tampone 1x , avendo il tbe al 5x?è urgente e sn letteralmente stanca , quindi scusate se ci sn errori , è una settimana che dormo 3circa 3 ore a notte, ho una teoria ragionevole ma desideravo sentire prima qualcuno di voi.grazie
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 30 giugno 2011 : 22:18:42
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Se hai il TBE 5X innanzitutto lo devi diluire 1:5.
Quindi ad es. 10 ml di TBE + 40 di H2O. Dopodichè aggiungi lo 0.8% di agarosio (quindi 0.8g/100ml): visto che hai 50ml ne aggiungi 0.4g.
Poi prendi la quantità che ti serve, nel tuo caso 40ml (ovviamente puoi anche fare i calcoli direttamente per avere un volume di 40 ml se vuoi)
Ah, e dai una lettura a queste pagine:
http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/
PS: 3 ore a notte per una settimana è una cosa da non fare, non importa quale sia il motivo. Stacca per un giorno e vedrai che sarai molto più produttiva. |
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biotecnologa86
Utente Junior
165 Messaggi |
Inserito il - 01 luglio 2011 : 10:33:46
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Se hai il TBE 5X innanzitutto lo devi diluire 1:5.
Quindi ad es. 10 ml di TBE + 40 di H2O. Dopodichè aggiungi lo 0.8% di agarosio (quindi 0.8g/100ml): visto che hai 50ml ne aggiungi 0.4g.
Poi prendi la quantità che ti serve, nel tuo caso 40ml (ovviamente puoi anche fare i calcoli direttamente per avere un volume di 40 ml se vuoi)
Ah, e dai una lettura a queste pagine:
http://www.molecularlab.it/principi/calcoli-laboratorio/
PS: 3 ore a notte per una settimana è una cosa da non fare, non importa quale sia il motivo. Stacca per un giorno e vedrai che sarai molto più produttiva.
purtroppo nn riesco a dormi sono agitata, lo so devo dormire ma mi sveglio in piena notte..cmq grazie per il consiglio e per il ragionamento .
Io mi trovo che ho fatto 40:5= 8ml, poi o.8mol su 100ml tutto per 40 ml= ottengo 0.32gquindi alla fine se ho un volume finale di 4oml meno i 32ml dovrò aggiungere 8ml di acqua.ti trovi?
Se invece ho 4 micro litri amplificato + una x incognita di loading buffer al 6x , devo portare ad un volume di 10micro litri.come fai?
io ho pensato ( anche se in ritardo) che 10microL li devo diluire 6x.quello che esce 1.66 periodico microL lo devo sommare ai 4microL.(il volume che ho), in modo tale avrò 5.6microl di buffer? è esatto il ragionamento? |
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roberta.s
Utente Junior
Città: Parigi
564 Messaggi |
Inserito il - 01 luglio 2011 : 11:39:51
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Il TBE 5X è una soluzione, quindi parli sempre di mL e non di g.
La concentrazione iniziale (il tuo stock) di TBE è 5X, quella finale (quella da te voluta) é 1X. Tu vuoi sapere quanto TBE 5X devi mettere in H2O per avere 40 mL di una soluzione di TBE con concentrazione finale pari a 1X. Quindi nella formula seguente la tua incognita è il volume iniziale:
concentrazione iniziale x volume iniziale = concentrazione finale x volume finale;
5X x volume iniziale = 1X x 40mL;
volume iniziale= (40 mL x 1X)/ 5X = 8 mL
Questo significa che devi prendere 8 mL di TBE 5X, metterli in un cilindro e portare a volume con 32 mL di H2O, in modo da ottenere cosi 40 mL di TBE 1X.
Stesso ragionamento per il loading buffer:
conc. iniz. x vol. iniz. = conc. fin. x vol. fin.;
6X x vol.iniz. = 1X x 10 uL;
vol.iniz.=10/6 = 1,6 periodico(nella pratica metti 1.7 uL di loading buffer e non cambia assolutamente nulla).
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