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 Scongelamento e ricongelamento campioni
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Kuradia
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13 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2011 : 14:42:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Kuradia Invia a Kuradia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti, qualcuno sa dirmi (e spiegarmi anche il motivo) se è possibili scongelare e ricongelare lisati da utilizzare per il western blot? Da quel che sento dire qualcuno lo fa ma ricongela i campioni solo se gli si aggiunge il sample buffer, qualcun altro dice che non si deve fare perchè le proteine perdono la loro struttura tridimensionale (ma in ogni caso non si denaturano comunque durante la corsa su gel??)e qualcun altro ancora invece lo fa tranquillamente (ricongelandolo e riutilizzandolo al massimo 3 volte)
Sapete dirmi qual è il comportamento giusto e perchè? Grazie in anticipo

knodel
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24 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2011 : 20:44:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di knodel Invia a knodel un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Normalmente si fa... Bisogna farlo bene.... Ossia scongelandoli in ghiaccio e riscongelando una volta finito.


Aggiungere sample mi sembra una cosa un po' inutile....forse intendi il buffer d estrazione...in questo caso sarebbe utile perché aggiungi inibitori delle proteasi freschi.......ma devi poi tener conto d quanto hai aggiunto per capire quanto hai diluito il tuo campione (che se nn e' concentrato e' un casino)

La storia della conformazione non l ho capita..... Se le metti a -80 le proteine congelano.... Che tu le abbia appena estratte o appena scongelate si comportano nella stessa maniera.... Quello che non gli fa bene sn gli sbalzi termici e le proteasi che le degradano
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pokypsi
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20 Messaggi

Inserito il - 20 dicembre 2011 : 13:20:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di pokypsi Invia a pokypsi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Concordo si puó fare senza troppi danni. Io cmq di solito mi faccio delle aliquote e scongelo solo quella che mi serve
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Kuradia
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13 Messaggi

Inserito il - 21 dicembre 2011 : 11:38:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Kuradia Invia a Kuradia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sì anche noi facciamo le aliquote, ma non troppo piccole quindi avanza sempre un bel po' di campione...@knodel, no no io mi riferivo proprio al sample buffer, chi lo fa dice che stabilizza le proteine, boh...vabbè grazie a tutti
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adelaide74
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2 Messaggi

Inserito il - 29 dicembre 2011 : 21:24:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di adelaide74 Invia a adelaide74 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
meglio aliquotare....scongelare e ricongelare per le proteine non va molto bene...
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