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walkingdisaster
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 08 agosto 2012 : 10:20:29
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Buongiorno a tutti, mi sono appena iscritta perché credo solo voi saprete aiutarmi...
per lavoro sto ripassando i miei vecchi appunti di microbiologia.
Dovrò fare continuamente diluizioni decimali seriali, ho capito il procedimento, però non riesco a essere sicura di riuscire a risalire a quante ufc su ml trovo.
Esempio, se nella piastra 10^-2 ho 6 colonie, dovrò moltiplicare per l'inverso del fattore di diluizione, quindi ho 6x100 cioè 600 ufc/g...
ma è giusto fare così?
Perché se è così nelle piastre delle diluizioni successive avrò un numero superiore di ufc, ma se la soluzione è diluita, il numero di colonie non dovrebbe diminuire?
Altra cosa, io sulla piastra 10^-1 scriverò -2 perché comunque prelevo 1ml e non 10, quindi opero già una diluizione, giusto?
Vi prego, non riesco a venirne fuori 
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 08 agosto 2012 : 11:06:15
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Tu parti da una soluzione iniziale ed è di quella che vuoi sapere il titolo. Quindi fai delle diluizioni seriali in ragione 10, piastri e conti le colonie.
Poniamo che tu abbia questa situazione (metto dei numeri inventati praticamente esatti, nella realtà ovviamente non sarà così)
Diluizione fatt. diluiz. nº di colonie
10^-1 10 6000 (queste in realtà sono troppe e non riesci a contarle)
10^-2 100 600
10^-3 1000 60
10^-4 10000 6
Moltiplicando il nº di colonie per il fattore di diluizione ottieni le UFC/ml. (60000 UFC/ml)
Tutto questo se hai fatto le diluizioni prendendo 1ml e portandolo a 10 e hai piastrato 1ml in ogni piastra, altrimenti devi tener conto anche del volume! Se ad es. hai piastrato solo 100ul hai messo 1/10 del volume (quindi 1/10 delle colonie) e devi moltiplicare per 10.
Citazione:
Altra cosa, io sulla piastra 10^-1 scriverò -2 perché comunque prelevo 1ml e non 10, quindi opero già una diluizione, giusto?
Questa cosa non l'ho capita! |
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walkingdisaster
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 08 agosto 2012 : 11:24:38
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Ciao, grazie mille sei stata gentilissima!!!
Esatto, le diluizioni dovrei farle mettendo 1 ml in 9 ml di acqua sterile, così otterrei la 10^-1, poi da questa prelevare 1 ml e metterlo in successivi 9 di acqua sterile per ottenere la 10^-2 e così via, fin lì ci sono...
però perdonami, sono testa dura e continuo a non capire, cioè... credo di aver capito il ragionamento, e mi sembra giusto che il numero di colonie sia superiore nella diluzione minore, perché appunto ci saranno più microbi...
però non riesco a fare il conto. cioè solo il 600 mi torna... se nella prima piastra il fattore di diluizione è 10, conterei 60 colonie, e non è giusto, nella seconda ne conterei 600, nella terza 6000... ecco perché non mi torna, perché dovrebbe essere il contrario come hai scritto te. Ma perché è il contrario?
Vorrei imparare a fare questi conti giusti...
Scusa mi sto vergognando un sacco della mia ignoranza, non riesco a venirne fuori
l'ultima cosa che ho scritto mi riferivo al fatto che magari io non piastro tutto il contenuto della provetta ma solo ad esempio 1/10 dei ml, e per questo faccio una diluizione... ma forse mi ha confuso una dispensa che ho letto ieri sera.. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 08 agosto 2012 : 11:55:36
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Scusa ma non capisco che conti vuoi fare! Non devi fare i conti per vedere quante colonie ci sono nella piastra, quelle le conti (vedi) direttamente, i conti li devi fare per risalire a quante UFC hai nella preparazione di partenza.
Proviamo a fare il ragionamento al contrario:
- poniamo che nella tua soluzione di partenza hai 60000 UFC/ml (tu però questo non lo sai ancora, è quello che devi calcolare)
- prendi 1ml di questa soluzione (quindi prendi in totale 60000 UFC) e lo metti in 10ml totali --> a questo punto hai 60000 UFC totali in 10ml che fa 6000 UFC/ml, quindi se ne piastri 1ml vedrai sulla piastra 6000 colonie
- prendi 1ml di questa diluizione 1 che è 6000 UFC/ml(quindi prendi in totale 6000 UFC) e lo metti in 10ml totali --> a questo punto hai 6000 UFC totali in 10ml che fa 600 UFC/ml, quindi se ne piastri 1ml vedrai sulla piastra 600 colonie
- prendi 1ml di questa diluizione 2 che è 600 UFC/ml(quindi prendi in totale 600 UFC) e lo metti in 10ml totali --> a questo punto hai 600 UFC totali in 10ml che fa 60 UFC/ml, quindi se ne piastri 1ml vedrai sulla piastra 60 colonie
- prendi 1ml di questa diluizione 3 che è 60 UFC/ml(quindi prendi in totale 60 UFC) e lo metti in 10ml totali --> a questo punto hai 60 UFC totali in 10ml che fa 6 UFC/ml, quindi se ne piastri 1ml vedrai sulla piastra 6 colonie
Questo è quello che fai "praticamente" ma l'unica cosa che vedi e "conti" sono le colonie che vedi sulla piastra.
A questo punto fai i conti per risalire a quante UFC ci sono nella soluzione di partenza, quindi "nºcolonie x fatt. diluiz." e in tutti i casi trovi 60000 UFC/ml.
Citazione:
l'ultima cosa che ho scritto mi riferivo al fatto che magari io non piastro tutto il contenuto della provetta ma solo ad esempio 1/10 dei ml, e per questo faccio una diluizione... ma forse mi ha confuso una dispensa che ho letto ieri sera..
Se ne piastri 1ml non ci sono problemi perchè stai facendo i conti su 1ml (UFC/ml).
Se piastrassi tutti i 10ml sarebbe come piastrare 1ml dalla soluzione di partenza, non avrebbe senso fare la diluizione!
Una diluizione 1:10 sarà sempre 1:10 sia che tu prenda 1ml e lo metta in 10ml o 10 ml e li metti in 100ml o 100ul e li metti in 1ml... quello che conta è il volume che semini rispetto a quello di partenza (1ml), se stai contando le UFC/ml devi riferirti ad 1ml quindi se semini 100ul devi moltiplicare per 10. |
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