Lentivirus e cPPT

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Il gene VI
Benjamin Lewin

Biologia marina
Giuseppe Cognetti, Giuseppe Magazzù, Michel Sarà

Il gene VI
Benjamin Lewin

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

Laboratorio

Biotecnologie

Lentivirus e cPPT

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Biotecnologie:

Siti Scientifici

Protocolli Laboratorio

Glossario

Didattica e Principi

Multimedia

Ultime notizie

Lentivirus

Quanto è utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

Giuditta
Nuovo Arrivato

6 Messaggi

Inserito il - 07 agosto 2013 : 12:39:56

Eccomi di nuovo a chiedervi un aiuto

Sto cercando di produrre del lentivirus. Il vettore che sto usando è un derivato di questo (http://www.addgene.org/12254/), hanno sostituito la porzione della GFP con una resistenza alla blasticidina.
Nel sito dicono "A popular cloning strategy is to clone into the PmeI site upstream of the EMCV IRES. You can also clone into the PacI or SwaI site.". PmeI e SwaI non potevo usarli, ho optato quindi per PacI usandolo per linearizzare il vettore e inserirvi il mio gene. Il clonaggio è stato un parto ma alla fine è andato. Purtroppo il lentivirus prodotto non esprime la mia proteina, mentre un controllo fatto in parallelo con un vettore che ho ricevuto già pronto ha un'efficienza ottima, facendomi escludere errori nella preparazione.

Il dubbio che mi attanaglia ora è...ho sbagliato a clonare il mio gene a monte del sito cPPT? Nel sito Addgene non ho trovato alcuna indicazione su una necessità di clonare a valle del tratto, anzi, il trafiletto che vi ho copiato mi ha lasciato intendere essere indifferente.
In letteratura ho invece trovato clonaggi solo a valle e anche articoli su una presunta efficacia del cPPT solo sulla porzione a valle, non su quella a monte. QUalcuno di voi ha esperienza in merito e saprebbe chiarirmi le idee?