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 anticorpi monoclonali e western blot
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Tag   anticorpi    ibridomi    western blot  Aggiungi Tag

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Shadow86
Nuovo Arrivato



32 Messaggi

Inserito il - 17 gennaio 2014 : 09:32:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Shadow86 Invia a Shadow86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scritto da MolecularLab Mobile

Sto preparando l'esame di biotecnologie farmacologiche e ho un dubbio riguardo alla produzione di anticorpi monoclonali con la metodica degli ibridomi e in particolare sullo screening degli ibridomi per individuare quali producono gli anticorpi verso l'antigene di nostro interesse. Il professore ha detto che si utilizzano a questo scopo o l'ELISA indiretto (per cui non ho problemi) o il western blot. Riguardo quest'ultimo dopo l'sds-page e il transfer su carta di nitrocellulosa come avviene la colorazione con anticorpi primario secondario nel caso degli anticorpi monoclonali? Si mette direttamente il secondario legato all'enzima? e l'antigene non si aggiunge? Il mio dubbio viene dal fatto che nel caso della produzione di anticorpi le proteine che sto separando sono giā anticorpi. Grazie mille in anticipo!

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 17 gennaio 2014 : 21:59:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Carichi l'antigene nel SDS-PAGE gel, corri, trasferisci su membrane tramite WB, blocchi con latte, incubi con l'anticorpo che vuoi testare, lavi per eliminare o ridurre il binding aspecifico, incubi con un secondario coniugato per es. ad una perossidasi, lavi ancora, aggiungi un substrato per la perossidasi e sviluppi.
Pregando di avere il segnale li' dove ti aspetti che sia la tua proteina.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

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