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trudi87
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
6 Messaggi |
 Inserito il - 30 giugno 2014 : 13:16:29
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Ciao a tutti,
il mio scopo è quello di esprimere delle proteine ricombinanti in batteri. Ho scelto "champion pET160/pET161 gateway expression with lumio technology, Invitrogen" e il mio primo dubbio era sul tag, secondo voi è meglio all'N-(pET160)o al C-terminale(pET161)?. Il mio secondo dubbio è sull'entry clone da usare. Sono indecisa tra pENTR/D-TOPO Cloning Kit e pENTR/SD/D-TOPO Cloning Kit, il primo è generico, il secondo pare che ottimizzi l'espressione in batteri, ma non ho capito come sia possibile, dato che l'espressione in batteri avverrà attraverso il vettore di espressione!
Grazie mille a tutti 
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 30 giugno 2014 : 19:52:27
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Beh la scelta se posizionare il tag all'N o al C-terminale è abbastanza soggettiva e dipende anche dall'uso che ne vuoi fare. Inoltre dipende anche dalla proteina, un tag può a volte dare fastidio al corretto folding e dipende dalla tua proteina se le possa dare meno fastidio da una parte o dall'altra. Non conosco nello specifico quei vettori di espressione (anche perchè a quanto vedo sono nuovi) però da una ricerca velocissima (e non molto accurata) mi sembra di capire che quello all'N-terminale sia tagliabile, quindi se vuoi poi eliminarlo ti conviene scegliere quello.
Controlla bene però, perchè come dicevo io ho fatto una ricerca velocissima.
Per quanto riguarda l'entry Vector l'SD ti aggiunge la sequenza Shine Dalgarno che è riconosciuta dai ribosomi batterici e aumenta l'espressione della tua proteina, la sequenza poi passa assieme a quella del tuo gene dall'entry vector al vettore di espressione, quindi ce l'avrai anche lì! |
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trudi87
Nuovo Arrivato
Città: Napoli
6 Messaggi |
Inserito il - 01 luglio 2014 : 15:39:51
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Grazie GFPina, grazie per la risposta! purtroppo non ho informazioni sul folding delle future proteine ricombinanti poichè non sono mai state prodotte, quindi mi sa che proverò alla cieca! |
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