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 Estrazione di DNA e RNA da insetti
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Tag   estrazione DNA    PCR    biologia molecolare  Aggiungi Tag

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silvana90
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61 Messaggi

Inserito il - 30 luglio 2014 : 16:53:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di silvana90 Invia a silvana90 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!
Potreste, per favore, descrivermi l'estrazione del DNA ed RNA da insetti. Mi mancano degli appunti a riguardo.

Grazie in anticipo

randomcoil
Nuovo Arrivato



8 Messaggi

Inserito il - 30 luglio 2014 : 21:30:22  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di randomcoil Invia a randomcoil un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Recentemente per estrarre RNA da Drosophila ho usato un reagente della bioline, il TRIsure. Estraggo sia da tessuto cerebrale isolato dalle larve sia da larve intere. Il reagente Ŕ aggiunto alla sospensione di tessuto/larve, nel caso delle ultime si omogenizza con un pestello, poi rimuovo i ghosts con uno spin in centrifuga. Segue aggiunta di cloroformio, agitazione, centrifugazione. Trasferisco in un nuovo tubo la fase superiore con l'RNA (uso sempre LoBind e RNase free, ho dato per scontato che tutto si fa sotto cappa e in ambiente RNase free) e aggiungo isopropanolo per la precipitazione, centrifugo, elimino il sovranatante e lavo il pellet in EtOH 75% freddo, dopo 10m di incubazione di nuovo centrifuga, lascio evaporare l'alcol per qualche minuto, elimino il sovranatante e risospendo l'RNA sul fondo dell'eppendorf in acqua RNase-free. Step finale incubazione a 37░ per 5 minuti, in modo da facilitare la solubilizzazione dell'RNA. ╚ tutto qui comunque (potevo linkartelo direttamente in effetti... va be'):

http://www.bioline.com/us/downloads/dl/file/id/2694/pi_50260_trisure_v2.pdf
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