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silvana90
Nuovo Arrivato
106 Messaggi |
 Inserito il - 30 luglio 2014 : 16:53:38
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Ciao a tutti!
Potreste, per favore, descrivermi l'estrazione del DNA ed RNA da insetti. Mi mancano degli appunti a riguardo.
Grazie in anticipo
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randomcoil
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 30 luglio 2014 : 21:30:22
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Recentemente per estrarre RNA da Drosophila ho usato un reagente della bioline, il TRIsure. Estraggo sia da tessuto cerebrale isolato dalle larve sia da larve intere. Il reagente è aggiunto alla sospensione di tessuto/larve, nel caso delle ultime si omogenizza con un pestello, poi rimuovo i ghosts con uno spin in centrifuga. Segue aggiunta di cloroformio, agitazione, centrifugazione. Trasferisco in un nuovo tubo la fase superiore con l'RNA (uso sempre LoBind e RNase free, ho dato per scontato che tutto si fa sotto cappa e in ambiente RNase free) e aggiungo isopropanolo per la precipitazione, centrifugo, elimino il sovranatante e lavo il pellet in EtOH 75% freddo, dopo 10m di incubazione di nuovo centrifuga, lascio evaporare l'alcol per qualche minuto, elimino il sovranatante e risospendo l'RNA sul fondo dell'eppendorf in acqua RNase-free. Step finale incubazione a 37° per 5 minuti, in modo da facilitare la solubilizzazione dell'RNA. È tutto qui comunque (potevo linkartelo direttamente in effetti... va be'):
http://www.bioline.com/us/downloads/dl/file/id/2694/pi_50260_trisure_v2.pdf |
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Estrazione di DNA e RNA da insetti
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