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 clonaggio in vettori retrovirali
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ori2c
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1 Messaggi

Inserito il - 05 novembre 2014 : 16:38:15  Mostra Profilo Invia a ori2c un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho molte difficoltà nel clonaggio in un vettore retrovirale. I plasmidi che ottengo sono tutti riarrangiati e non contengono l'inserto. Qualcuno mi sa dire se devo seguire un particolare protocollo per il clonaggio in questi vettori oppure darmi dei consigli per impedire il riarrangiamento del plasmide?

Geeko
Utente

Ctenophor1.0

Città: Milano


1042 Messaggi

Inserito il - 05 novembre 2014 : 18:15:59  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Geeko Invia a Geeko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scritto da MolecularLab Mobile

Ho avuto il tuo stesso problema. Si trattava di un vettore lentivirale e quello che succede solitamente è che una volta trasformati i prodotti di ligazione nel batterio avvengono varie ricombinazioni a livello delle regioni LTR...
Comunque sono riuscito ad ottenere almeno un clone positivo per il costrutto che desideravo, tuttavia per paura che durante le successive fasi di crescita potessero avvenire di nuovo eventi di ricombinazione mi sono procurato uno speciale ceppo di coli, si chiama Stbl3. Il ceppo è appositamente disegnato per abbattere questi eventi di ricombinazione indesiderati e devo dire che ha funzionato bene (anche se nel mio caso fossi riuscito ad ottenere comunque il mio DNA ricombinante). Ti consiglio di adottare questo ceppo per ritentare una ligazione.


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