Problemi analisi FACS

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RossEpigenetic
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2 Messaggi

Inserito il - 12 novembre 2014 : 23:07:26

Ciao a tutti,

premetto che � stata la mia prima analisi FACS, e che ho semplicemente seguito un dottorando in questo esperimento, ma sono successe cose strane e volevo il parere di qualche esperto di FACS.
Si tratta di linfoblastoidi WT e mutanti trattati con KBrO3 per vedere se nelle 2 linee ci sono differenze nella risposta al danno al DNA.

1) Quando abbiamo pellettato i campioni fissati con EtOH e lasciati a 4�C, c'erano tanti clamps/aggregati, e abbiamo dovuto centrifugare di nuovo per avere un unico pellet e passare ai lavaggi con PBS.
2) Cosa assurda: dopo il lavaggio in PBS le cellule sembravano esser scomparse, nel senso che non c'era pi� pellet, ma guardando bene le falcon ci siamo accorti che sembravano essere adese alle pareti delle falcon. Abbiamo comunque continuato con lo staining con PI e oggi abbiamo analizzato al FACS e in tutti i campioni manca il picco G2/M e in picco G1 non � molto bello, ha una gobbetta a sinistra.