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Vanhalen78
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 Inserito il - 25 marzo 2015 : 09:11:20
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Buongiorno a tutti, ho dei problemi nell'identificare, tramite tecnica citofluorimetrica, la popolazione cellulare degli Osteoclasti (differenziata in vitro da PBMC). Vi spiego i miei problemi.
Problemi Citofluorimetro:
- Parametri fisici per osteoclasti
FSC e SSC molto bassi
- Fluorocromi
per avere PC7 e Alexa488 negativi abbiamo dovuto abbassare moltissimo il fotomoltiplicatore
- CD3
Quando passiamo il tubino con CD3 il 60% di cellule risultano positive (popolazione superiore, inferiore e la percentuale aumenta anche se prendo tutti gli eventi).
- CD14+PA (Alkaline Phosphatase)
Quando passiamo il tubino con CD14 e PA: CD14 presente, ma orribile e PA inesistente
Domande:
- Possibile che i CD3 vivano così a lungo?
- Possibile che staccando le cellule con scraper si attacchi il CD3?
- Possibile che staccando le cellule con scraper distruggo le proteine superficiali di mio interesse?
- Possibile che PC7 non vada bene perchè Tandem?
- Cellule talmente grandi che creano problemi per la tecnica di citofluorimetria?
Grazie mille a tutti per l'aiuto!!!!!
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