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Limpet
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Città: Roma


83 Messaggi

Inserito il - 15 giugno 2015 : 18:47:12  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Limpet Invia a Limpet un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve,

mi accingo a estrarre RNA con il kit ambion purelink mini kit.
Cerco di capire la funzione di ogni buffer e solvente, perchè anche se un kit con tutto pronto, direi che è importante.
Dopo avere lisato meccanicamente il tessuto, sapete dirmi quale è la funzione dell'aggiunta dell'etanolo 70%? nella sezione binding/washing?
Lo chiedo perchè in alcuni protocolli modificati utlizzano invece l'EtOh 100%.

Vi riporto il protocollo---> al paragrafo Binding, Washing and Eluition:

1. Add one volume of 70% ethanol to the tissue
homogenate
2. Mix thoroughly by shaking or vortexing to disperse any
visible precipitate that may form after adding ethanol.
3. Transfer #8804;700 #956;L of the sample (including any
remaining precipitate) to the Spin Cartridge.
4. Add 700 #956;L Wash Buffer I to the Spin Cartridge.
Centrifuge at 12,000 × g for 15 seconds at room
temperature. Discard the flow-through and the
Collection Tube. Place the Spin Cartridge into a new
Collection Tube.

etc etc etc

L'etanolo dovrebbe portare via tutte le impurità (proteine e altro...) no?

Continuo a cercare risposte on-line ma attendo vostre nuove. Siete sempre molto utili.

Grazie,

Ftoresearch
Nuovo Arrivato



8 Messaggi

Inserito il - 17 giugno 2015 : 17:36:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ftoresearch Invia a Ftoresearch un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, l'etanolo serve semplicemente a far precipitare l'acido nucleico. Non so precisamente la differenza tra l'uso dell'etanolo al 70% o al 100%. Sicuramente con quello al 70% si avrà una disidratatzione ( e quindi una precipitazione)più blanda rispetto a quella che si può avere con l'etanolo assoluto. Spero di essere stato utile.
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