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kiky986
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 15 ottobre 2015 : 20:28:31

se un gene � composto da 4 esoni (1, 2, 3, 4) ed ha 2 isoforme: isoforma 1 (esoni 1, 2, 3) ed isoforma 2 (1, 2, 4). Dove si devono disegnare i primer per real time RT PCR per analizzare i livelli di espressione dell'isoforma 2?
come faccio a capirlo? mi spiegate bene il ragionamento?

Geeko
Utente

Citt�: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 15 ottobre 2015 : 22:44:10

Bhe dato che parli di "espressione" dell'isoforma 2 e vuoi valutarla mediante RT-PCR (cio� Retrotranscription PCR) significa che avrai bisogno di estrarre gli mRNA dal tuo campione, sottoporli a retrotrascrizione in vitro e otterrai cos� il tuo cDNA. A questo punto sottoponi il cDNA a PCR usando i primer che devi disegnare! Ora, se vuoi valutare non l'espressione del tuo gene in generale, bens� della sua specifica isoforma 2, dovrai usare una coppia di primers specifica per quella isoforma. Domanda seguente, in cosa si differenzia l'isoforma 2 dalla 1? Bhe lo hai scritto tu, quindi ora hai qualche elemento in pi� per rispondere no?

kiky986
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 15 ottobre 2015 : 23:07:04

quindi tra le seguenti risposte tu come risponderesti?
- forward sull'esone 1 e reverse sul 4
- forward sul 3 e reverse sul 4
- forward sul e e reverse sul 3
- forward sul 2 e reverse sul 4

Geeko
Utente

Citt�: Milano

1043 Messaggi

Inserito il - 16 ottobre 2015 : 18:45:27

Ahahah mi rifai la domanda? Perch� non provi a dare tu una risposta intanto e poi ti do il mio parere?