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pcr tp-pcr oligonucleotidi biologia molecolare amplificazione

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dinorega
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25 Messaggi

Inserito il - 24 novembre 2015 : 10:53:33

Salve a tutti mi ritrovo stamattina sugli appunti tale tecnica utilizzata per diagnosticare la presenza dell allele mutato nella distrofia miotonica di Steinert riguardo alle malattie da ripetizioni di trinucleotidi. Ho capito che in tale tecnica vengono utilizzati tre oligo, uno per specifico per i trinucleotidi e uno che si attacca all esterno delle ripetizioni.....poi i miei appunti terminano purtroppo qui e non è presete sul libro tale tecnica ne su internert ho trovato protoccoli soddisfacenti la mia richiesta.Qualcuno di buon cuore potrebbe illustrarmi passo passo il meccanismo?
grazie in anticipo

Hachi90
Nuovo Arrivato

9 Messaggi

Inserito il - 15 gennaio 2016 : 12:51:37

Io ho capito che vengono utilizzati prima i 2 oligo: uno esterno alla sequenza bersaglio e l'altro complementare alla sequenza ripetuta.. il primo marcato, il secondo ha il 5' in comune con il terzo primer... il terzo primer quando sarà usato amplificherà la metà del prodotto dell'estensione dell'oligo 2... Si avranno amplificati di dimensioni scalari, meno sono abbondanti e più lungo sarò l'amplificato, visto che tendono ad andare verso l'allele più lungo possibile.Si utilizza l'elettroforesi capillare per analizzare gli ampliconi.
Io ho capito questo... altri ne sanno di più?