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 da pcr classica a real time
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Tag   real time    pcr classica  Aggiungi Tag

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adrenerg1co
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11 Messaggi

Inserito il - 20 settembre 2018 : 12:13:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di adrenerg1co Invia a adrenerg1co un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti

Quali passaggi e strategie si devono fare per portare un protocollo di pcr classica ad uno di real time? si può fare sempre? cosa posso leggermi?

Grazie

domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi

Inserito il - 20 settembre 2018 : 12:31:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In che senso?
Una pcr classica clona, una real time pcr quantifica, fanno due cose diverse, i primer saranno diversi (un amplificato di real time pcr non supera mai i 250pb).
https://toptipbio.com/real-time-pcr-primer-blast/

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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adrenerg1co
Nuovo Arrivato



11 Messaggi

Inserito il - 21 settembre 2018 : 11:39:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di adrenerg1co Invia a adrenerg1co un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ci sono real time di presenza e assenza; a me interessa questo tipo ... l'amplificato è di 200 bp, penso che potrei usare anche gli stessi primer, e la proporzione con i reattivi e le temperature che non saprei impostare
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 24 settembre 2018 : 17:03:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In genere se l'amplificato è abbastanza piccolo (200bp come il tuo caso vanno benissimo) e non hai aspecifici nella tua amplificazione, puoi usare gli stessi primers anche per una real-time, con SYBrGreen.

Per le condizioni devi vedere la mix di real-time che utilizzi e qual'è la DNA polimerasi utilizzata, perché le temperature di anealing variano anche in base alla polimerasi. Però basandoti sulle condizioni della end-point poi fare delle prove.
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