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puntointerrogativo
Nuovo Arrivato
8 Messaggi |
Inserito il - 16 ottobre 2003 : 20:00:30
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Altra domanda..
quali tecniche utilizzeresti per diagnosticare una malattia prenatale causata da una delezione?
A me vengono in mente FISH SOUTHERN BLOT E SEQUEZIAMENTO ,ma se sono giuste in base a cosa uso una o l'altra?
grazie a tutti
ciao
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atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
Città: Milano
2484 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2003 : 17:40:41
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Sono tre tecniche che agiscono a livelli diversi:
la FISH a livello cromosomale
la Southern ed il Sequenziamento a livello del DNA.
In primis io opterei per la Fish, per avere una veloce diagnosi.
Per avere poi, un analisi più accurata passerei alle altre due anilisi. In particolare se il frammento iè stato ben sequenziato, potrei pensare al sequenziamento direttamente, senza passare per la Southern.
Mi viene in mente, però che anche la PCR potrebbe essere usata a livello qualitativo per la diagnosi, basterebbbe infatti che un primer sia scelto a bordo della zona deleta, ed un altro nella zona deleta: se vi è la delezione, non si avrà amplificazioni, altrimenti si.
A me viene in mente questo.. ad altri?
Riky
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 23 ottobre 2003 : 22:35:46
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In effetti la FISH si può usare, ad esempio per diagnosticare la Duchenne.
Personalmente penso che la PCR sia un ottima soluzione, soprattutto perchè veloce ed automatizzabile (in realtà non ho la più pallida idea dei tempi della FISH...  ).
La PCR viene ad esempio usata per determinare la presenza di traslocazioni cromosomiche, come la 14-18 che dà linfoma.
Se la delezione è molto estesa è anche possibile usare la PFGE (pulse field gel electrophoresis), anche se non sono sicuro di quale sia la risoluzione (in bp) di questa tecnica.
nICO
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atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
Città: Milano
2484 Messaggi |
Inserito il - 24 ottobre 2003 : 00:06:11
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Riguardo la risoluzione della PFGE (pulse field gel electrophoresis), ho trovato due articoli (primo e secondo)
Da cui riporto:
"The actual "window" of separation achieved is determined by the conditions of electrophoresis: at the lower end, one can obtain separation in the range of 20-200 kb, just beyond that possible with classical electrophoresis; at the upper end, one can obtain separation in the range of 1.4-9 megabases"
Ed una eventuale Reference:
Barlow, D. P., and Leharch, H. (1987).
Genetics by gel electrophoresis: the impact of pulsed field gel electrophoresis on mammalian genetics. Trend. Genet. 3: 167-171.
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Myxomatosis
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 18 novembre 2003 : 21:54:49
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La FISH va bene per le traslocazioni, ma per le delezioni non molto. Se la delezione e' piccola, pui non notare differenze di segnale tra il cromosoma sano e l'omologo deleto, almeno che non manchi l'intero pezzo riconosciuto da una sonda, ma e' difficile! Credo che la cosa migliore sia la CGH. E' molto sensibile e ti dà indicazioni sulla localizzazione della delezione. Il sequenziamento puoi farlo solo se sai gia' cosa cercare, o ti toccherebbe sequenziare l'intero genoma del paziente!!! Idem per il Southern.
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atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
Città: Milano
2484 Messaggi |
Inserito il - 18 novembre 2003 : 22:19:34
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Ciao,
E ben arrivato. :-)
Che cosa è la CGH? In cosa consiste?
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atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
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