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demish
Nuovo Arrivato
45 Messaggi |
 Inserito il - 27 novembre 2007 : 15:44:05
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Ciao a tutti,
come sapete per la produzione degli anticorpi monoclonali si usa ancora la metodica descritta da Kohler e Milstein nel '75.
Ovvero si ibridizzano cellule mielomatose e linfo B specifici per un determinato antigene per ottenere ibridomi che sono immortali e che producono anticorpi monoclonali.
Stavo pensando, non sarebbe meglio (invece di far fondere le 2 cellule) formare i cDNA dagli RNA delle Ig dei Linfo B specifici per un antigene e transfettarli in cellule mielomatose?
Ciao ;)
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MdM |
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 27 novembre 2007 : 19:49:48
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in effetti quello che tu dici si fa, tuttavia conta che non è così semplice poiché non è solo 1 mRNA a partecipare a tutto il processo, e poi bisogna passare comunque per gli ibridomi altrimenti dopo un po' la cellula B muore per apoptosi.
Molte ditte lo fanno, soprattutto per aumentare la produzione di anticorpi che in vitro è molto scarsa. Un po' di tempo fa alcune ditte iniettavano queste cellule attivate nel peritoneo dei topi e poi raccoglivano i fluidi peritoneali con un lavaggio e uscivano quantità immense di anticorpi... non ricordo effettivamente il rapporto in vivo vs in vitro... ma so che bastavano 2-3 topi per un lotto di produzione. Ora è illegale tale procedimento.
Però le ditte badano ai costi e tempi di produzione, fare gli ibridomi costa pochissimo e poco lavoro, le cellule durano per tanto tempo ed è assicurato il successo. Tanto che quando fanno gli ibridomi per un anticorpo ne fanno sempre diversi tipi contemporaneamente e poi li valutano uno per uno. Poi si sceglie il migliore e si amplifica.
L'ottenimento dei cDNA necessari per fare l'anticorpo è molto difficile, molto costoso e soprattutto molto lungo, nel frattempo magari si trova un anticorpo monoclonare migliore e devi ricominciare da zero. Infatti questa tecnica è stata utilizzata su anticorpi molto buoni e famosi come quella dell'actina, tubulina etc, che sono ab molto richiesti e dove non c'è tanta concorrenza a fornire l'anticorpo sempre più specifico, quello che va già bene.
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demish
Nuovo Arrivato
45 Messaggi |
Inserito il - 27 novembre 2007 : 21:02:14
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Come fa a morire per apoptosi se è una cellula tumorale?
Comunque da quanto ho capito dalla tua risposta usare i cDNA non è più vantaggioso degli ibridomi, però mi viene in mente il fatto che mentre con gli ibridomi te hai solamente l' AB normalmente secreto dalla cellula, con i cDNA diciamo che potresti "giocarci", ovvero potresti inserirgli mutazioni e vedere che effetto avranno sull'affinità per l'antigene, o perchè no provarli in vivo.
In effetti non è semplice come a parole, me ne rendo conto. |
MdM |
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Balsamo del Canadà
Nuovo Arrivato
Prov.: Verbano-Cusio-Ossola
Città: Verbania
97 Messaggi |
Inserito il - 28 novembre 2007 : 11:07:35
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Come dice Neuro il processo di clonazione di un cDNA non è così semplice ed evidente. Spesso ci sono dei problemi nella retrotrascrizione e non hai dei cDNA completi, poi devi trovare un sistema di espressione adeguato che funzioni e che venga mantenuto in modo stabile senza "intossicare" la cellula...il processo è sicuramente più lungo tenendo poi conto del fatto che il cDNA non è singolo.
Le cellule melomatose non muoino certo..però appunto lo svantaggio sta nel procedimento prima. Comunque tieni conto che se uno sta producendo un anticorpo monoclonale di solito lo fa per scopi applicativi tipo rivelazioni, immunoprecipitazioni e così via. Quindi non interessa poter variare la sequenza o studiare effetti di mutazioni. Basta sapere che è monoclonale ed efficace. E' più comnodo fare uno screening di molti cloni e cercare effettivamente il migliore, piuttosto che averne uno e progettare mutagenesi sito specifica per variarlo. Tenendo soprattutto conto che la mutagenesi è un altro processo abbastanza lungo.
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-B.del C.- |
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 28 novembre 2007 : 20:31:14
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Citazione:
Messaggio inserito da demish
Come fa a morire per apoptosi se è una cellula tumorale?
se leggi bene mi riferivo alle cellule B, che potrebbero essere paragonate a vere e proprie colture primarie, e come si sa sono molto delicate e facili a morire. |
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