SINTESI DI MACROMOLECOLE

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GENDET56
Nuovo Arrivato

16 Messaggi

Inserito il - 04 gennaio 2006 : 13:48:33

So che si prende una quantit� di 30 microC(micro curie)di UDP marcato,volume di 3 microl e rna polimerasi, si porta tutto a volume fino a 100 microl.
Si prende dal campione una quantit� di 10 microl e lo si pipetta sul filtro standard.
Con uno scintillatore si misura la radioattivita' in colpi al minuto.
Per eseguire la sintesi di macromolecole si deve capire quante macromoli sono incorporate nella molecola di rna sintetizzato.

*[3000 microC : 1 nMole = 30 microC : X]
X= 0,01 nM
* Mi potete spigare questa formula?
3000 microC da dove li ricaviamo?

Lo schema:

10 microl => t=10 minuti=> lavaggio TCA (acido tricloro acetico per far precipitare le macromolecole) => scintillatore => 800000 cpm

la formula per sapere la concentrazione � :
800000 cpm : x picomoli = 100000 cpm : 1 picomole [8 PICOMOLI]

Vorrei sapere dettagliatamente questa tecnica scritta sopra che mi � stata spiegata non approfonditamente.
Di questa tecnica non so' come da 1picomole ci ha dato 100000 cpm e
da * 30 microC come fa' a darci una concentrazione di 0.01 nm?
GRAZIE

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 04 gennaio 2006 : 22:30:49

Hmmmm... ma e' una sintesi di probe marcate? O che? Ci dovresti dare un po' piu di dettagli!

Comunque sia, direi che per trovare le micromoli incorporate manca un dato, cioe' la concentrazione di DNA che metti nel campione iniziale (se ho capito bene l'esperimento). La formula che hai scritto sinceramente non mi sembra avere molto senso, perlomeno messa cosi.

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GENDET56
Nuovo Arrivato

16 Messaggi

Inserito il - 05 gennaio 2006 : 13:05:54

chick80: Infatti non c'� la concentrazione di DNA STAMPO, che nella spiegazione della sintesi di macromolecole da precursore radioattivo manca.
Ma allora il risultato di 8 picomole � riferito alla quantit� di NTP marcati radioattivamente incorporati nella molecola di rna sintetizzato?

Di questa metodica ci sono molti punti oscuri che non ho capito.
Se gentilmente me la potete spiegare bene?
GRAZIE.