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antonella85
Nuovo Arrivato
Città: Firenze
15 Messaggi |
 Inserito il - 07 settembre 2008 : 17:36:10
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qualcuno mi aiuterebbe a capire come si producono gli anticorpi policlonali?? l'esame di immunologia è sempre più vicino... e io sono sempre più in crisi 
vi prego aiutatemi 
ciao ciao
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
 Inserito il - 07 settembre 2008 : 17:44:08
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gli anticorpi policlonali riconoscono epitopi differenti di uno stesso antigene,sono anticorpi ricavati da sieri di diversi animali per uno stesso antigene appunto
cmq.... prova ad usare la funzione cerca nel sito e' stato detto piu' volte questo fatto
ciao |
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antonella85
Nuovo Arrivato
Città: Firenze
15 Messaggi |
Inserito il - 07 settembre 2008 : 18:07:05
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ciao patrizio... si avevo già cercato... ma non ho trovato nulla riguardo le tecniche di produzione degli anticorpi... si parla prevalentemente di differenze fra mono e policlonali...
a me interessa sapere come si costruiscono...
tu sapresti aiutarmi a chiarire questo dubbio??? 
grazie |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 07 settembre 2008 : 18:40:32
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premetto che non ne ho mai prodotti 
cmq il principio credo sia quello di trovare degli epitopi che vadano bene con ciascun anticorpo,cioe' che non formino ad esempio strutture tridimensionali che in presenza di SDS non legherebbero ,oppure stando attenti che non leghino altri antigeni in cellula.per la loro produzione appunto si inserisce la proteina nell animale meglio se una parte piu' interessante di essa,dopo di che viene prelevato il siero ( questo in linea di massima ,non ti saprei dire con maggiori dettagli) |
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Patrizio
Moderatore
Città: Barcellona
1912 Messaggi |
Inserito il - 07 settembre 2008 : 18:41:35
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Giuliano abbiamo Corisposto..entrambi in linea di massima  .... la linea e' giusta |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 07 settembre 2008 : 18:57:49
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In linea di massima, per produrre anticorpi policlonali innanzitutto ti serve un carrier per una sequenza antigenica di tuo interesse che hai individuato magari con un pogramma...Di solito si usa la KLH (Keyhole Limpet Hemocynin) che pui coniugare grazie a dei residui di anidride maleica a dei residui di cisteina terminale che ti sarai fatto mettere sulla sequenza per cui vuoi produrre Abs...Coniughi quindi il peptide sintetico con il carrier, diciamo che lo puoi visulaizzare come una sfera (il carrier) con attaccate tante bandierine, che sono tante copie della tua sequenza antigenica, e inietti il coniugato in un mammifero, metti un coniglio, con adiuvante di Freund per far sviluppare infiammazione...Aspetti 14 giorni dalla prima iniezione, dopodiché fai un richiamo senza adiuvante e dopo 7 giorni fai un test ELISA su siero per valutare il titolo anticorpale...Solitamente non è abbastanza alto, quindi fai un ulteriore richiamo e aspetti altri 7 giorni, fai un ulteriore ELISA e se il titolo anticorpale è buono procedi con un salasso...Isoli il siero, dopodiché lo fai passare in una colonna in cui la fase stazionaria è coniugata con proteina A, che ha forte affinità per l'Fc dele IgG...L'eluizione avviene con un atampone acido, che viene neutralizzato...E' quindi necessaria una dialisi per risospendere le IgG in PBS o in altro tampone fisiologico...Dopodiché fai passare il tuo eluato dializzato in una colonna in cui la fase stazionaria è costituita da sefarosio coniugato col peptide di tuo interesse sempre per via della formazione di gruppi maleimmidici e puoi così isolare i tuoi Abs policlonali eluendo...
EDIT: Dimenticavo, prima di inoculare il coniugato devi fare un prelievo per testare il livello basale di Abs sierici in quel coniglio, cioè usi il campione come bianco al momento dei test ELISA. |
 
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antonella85
Nuovo Arrivato
Città: Firenze
15 Messaggi |
Inserito il - 07 settembre 2008 : 19:07:56
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in linea di massima ho capito!!!
grazie a tutti... schuldiner86 sei stato chiarissimo |
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 07 settembre 2008 : 19:12:00
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| Adesso stavo cercando anche il protocollo che avevo io su internet, ma non riesco più a trovarlo e non mi ricordo di quale casa era il kit, c'era spiegato tuto, passaggio per passaggio...Comunque se cerchi in giro dovresti trovare qualcosa... :) |
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antonella85
Nuovo Arrivato
Città: Firenze
15 Messaggi |
Inserito il - 07 settembre 2008 : 19:22:49
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beh.. se riuscissi a trovare anche il protocollo mi renderesti ancora più felice!!
in ogni caso il principio generale mi è chiaro... ora cerco di approfondire un po... in modo da fare un esame decente!!!
grazie ancora
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Schuldiner86
Utente Junior
Prov.: Viterbo
Città: Bologna
581 Messaggi |
Inserito il - 11 settembre 2008 : 13:22:21
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| Non mi chiedere come ho fatto a recuperarlo ma non lo so nemmeno io, comunque >>>QUI<<< c'è spiegata tutta la tecnica nei dettagli...Mi dispiace di non avere il tempo di spulciare il sito per bene che sono collegato da un internet point, altrimenti ti avrei cercato il protocollo...Appena posso vedrò quello che riesco a fare... |
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