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fabiana70
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 04 novembre 2008 : 12:55:06
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qualcuno mi può aiutare?
Devo eseguire uno studio di attività virucida e una premessa del saggio è partire da un titolo virale minimo di 10^8.
il titolo virale massimo che ottengo è 10^6.
come posso amplificarlo? nel metodo si parla di ultracentrifugrazione...
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
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fabiana70
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 14:50:49
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il problema che l'ultracentrifugazione non è nelle mie possibilità.
perchè parli di concentrazione di siero?
secondo la norma che applico la colura cellulare e di conseguenza la sospensione virale sono in MEM con FCS2%.
ho letto da qualche parte nel forum (in una tua risposta mi sembra) che il siero inibisce l'infettività, quindi suggerisci di abbassare la percentuale?
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 15:07:03
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l'assenza di siero è indicata per alcuni virus, altri stanno bene con il 2%. Il problema se è troppo alto è che interferisce con le sue proteine nell'infezione, quindi la resa è minore. Ho suggerito solo delle prove, perché non sono certo che si possa fare: ad esempio se il virus che usi è influenzale cresce bene su MDCK, ma anche su altre cellule come le HeLa, anche se in questo caso mi pare che il titolo sia un po' più basso. Il modo sicuro per aumentare la concentrazione di virus è solo l'ultracentrifuga, mancando quella si dovrebbero fare delle prove cambiando vari fattori e vedendo quello che succede.
Prova ad esempio ad usare un quantitativo diverso di virus per l'infezione, o cambiare appunto cellule o quantitativo di siero. Ripeto, son prove senza nessuna certezza.
Oppure trasforma il protocollo, se puoi, in modo da usare 10^6 virus invece che 10^8.
Per curiosità, che virus e che protocollo stai usando? |
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fabiana70
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 04 novembre 2008 : 15:25:48
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la norma è la UNI EN 14476.
in poche parole permette, anzi "permetterebbe" di definire un disinfettante virucida solo nel caso in cui si riesce ad ottenere nelle condizioni sperimentali prescelte una riduzione di 4 Log nella titolazione virale.
E'per questo che mi serve un titolo di almeno 10^8, perche con tutte le diluizioni previste dal protocollo per mettere a contatto la sospensione virale con il disinfettante in presenza o meno di sostanze interferenti, inattivazione dell'attività disinfettante che si ottiene con diluizione 1:10 i medium freddo e le successive diluizioni per la titolazione virale, va a finire che la riduzione di 4 Log me la perdo...
La norma richiede l'uso di Poliovirus type 1 e Adenovirus type 5 che faccio amplificare e titolo su HeLa.
per l'Adeno ottengo un titolo 10^8 e più, per il polio ho dei seri problemi.
Sto provando ad utilizzare le Vero ma mi sembra che sia anche peggio...
proverò a titolare e recuperare per amplificare a tempi diversi e per più volte.. speriamo
grazie
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Eziad
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
36 Messaggi |
Inserito il - 01 marzo 2009 : 19:48:21
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per ottenere un titolo più lato quando amplifichi il virus dovresti sonicare o fare dei passaggi caldo-freddo per rompere tutte le cellule e liberare i virioni.
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Eziad |
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amplificazione titolo virale
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