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asabri
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5 Messaggi

Inserito il - 21 maggio 2009 : 13:04:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di asabri Invia a asabri un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho proposto ai miei studenti di liceo la conta vitale mediante diluizioni seriali dei batteri lattici dello yogurt. Premetto che il mio laboratorio è piuttosto sguarnito e pertanto ci siamo arrangiati con materiale monouso sterile comprato in farmacia. Avevo a disposizione piastre per il conteggio (plate count agar), abbiamo incubato a 37-38 °C per 48 ore, ma con mio grave disappunto non è cresciuto niente se non sulle piastre di controllo lasciate per un po' all'aria del laboratorio. Quale potrebbe essere il problema? Il terreno nutritivo generico delle piastre non è adatto alla crescita dei batteri lattici? Lo yogurt era di pessima qualità e non conteneva abbastanza cellule vitali ( abbiamo seminato le diluizioni da 10-1 a 10-6, abbiamo preparato qualche vetrino con la colorazione di Gram e abbiamo trovato solo streptococchi, niente bacilli)?
Ringrazio anticipatamente chi volesse darmi una mano a mettere meglio a punto la metodica.

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 21 maggio 2009 : 13:28:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Esistono terreni appositi per i lattobacilli.
Qui trovi una lista con le referenze.

A quanto leggo polisorbato, acetato, magnesio e manganese sono importanti per la crescita di questi batteri.

Questo articolo descrive un terreno della composizione più semplice
Readily Prepared Medium for Cultivation of Lactobacilli

Non so bene quale sia il tuo budget... ma dando una veloce occhiata ho visto che puoi trovare 500 g di MRS per meno di 50 euro che non è esageratissimo come prezzo. (conta che con 500g fai circa 10l di medium...)

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mak_steon
Utente Junior



138 Messaggi

Inserito il - 21 maggio 2009 : 14:48:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mak_steon Invia a mak_steon un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Io ho fatto una conta viale da yogurt proprio 15 giorni fa.

Ho utilizzato MRS pH 5.4 per i lattobacilli, M17 per gli streptococchi, e VRBA per evntuali contaminanti fecali (che non ci dovrebbero essere).
I lattobacilli li ho incubati in anaerobiosi, anche se dovrebbero crescere anche in presenza di ossigeno.

Che tipo di yogurt era? fatto in casa o comprato?
In alcuni yogurt è possibile anche non trovare latobacilli anche se è strano.
Inoltre su PCA comunque qualcosa doveva crescere, anche se effettivamente alcuni lattobacilli hanno richieste nutrizionali più complesse.

Come suggeriva anche chick, l'MRS credo sia il terreno più adatto ed economico per i lattobacilli.
Un'altra cosa: prova anche a tenerli in termostato qualche giorno in più, se non stanno benissimo al momento della semina può darsi che abbiano bisogno di più tempo per svilupparsi.

Ciao
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mak_steon
Utente Junior



138 Messaggi

Inserito il - 21 maggio 2009 : 14:52:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mak_steon Invia a mak_steon un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ah, mi sono dimenticato: le diluizioni dorebbero essere sufficienti, inoltre se ci sono abbastanza cellule da poterle vedere al microscopio si dovrebbe essere intorno almeno a 10^4-10^5 se non ricordo male.
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asabri
Nuovo Arrivato



5 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2009 : 09:09:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di asabri Invia a asabri un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie per i vostri suggerimenti, come dicevo nella premessa non siamo in grado di incubare in anaerobiosi, non possiamo preparaci i terreni perchè non abbiamo l'autoclave, per il prossimo anno scolastico ordinerò piastre già preparate con il terreno che mi avete suggerito.
A proposito di autoclave: è possibile sterilizzare a vapore in una comune pentola a pressione?
Grazie per l'aiuto.
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asabri
Nuovo Arrivato



5 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2009 : 09:12:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di asabri Invia a asabri un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
dimenticavo: lo yogurt era di tipo industriale e abbondantemente dentro la data di scadenza
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2009 : 10:02:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
è possibile sterilizzare a vapore in una comune pentola a pressione?


Immagino che vada bene... magari non è comodissima come cosa, ma perchè no?

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