Forum

Nome Utente:
Password:
Riconoscimi automaticamente
 Tutti i Forum
 Laboratorio
 Biologia Molecolare
 Confusione !!!
 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
I seguenti utenti stanno leggendo questo Forum Qui c'è:

Aggiungi Tag Aggiungi i tag

Quanto è utile/interessante questa discussione:

Autore Discussione  

GfCampione
Nuovo Arrivato


Prov.: Palermo
Città: Perugia


36 Messaggi

Inserito il - 02 luglio 2009 : 18:29:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GfCampione  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GfCampione  Invia a GfCampione un messaggio Yahoo! Invia a GfCampione un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti, l'esame si avvicina e la confusione aumenta, quindi chiedo a voi:

1. In che modo gli aminoacidi sono legati al corrispettivo tRNA ??

2. Quali sono i metodi di marcatura delle sonde oligonucleotidiche ??

3. Descrizione dei diversi meccanismi di ricombinazione e importanza biologica (in linea generale)

Vi ringrazio anticipatamente per l'aiuto !!!!!!!!!!

GfCampione
Nuovo Arrivato


Prov.: Palermo
Città: Perugia


36 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2009 : 17:06:45  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GfCampione  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GfCampione  Invia a GfCampione un messaggio Yahoo! Invia a GfCampione un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Raga' nessuno sa darmi una mano?????
Torna all'inizio della Pagina

mikymiky
Nuovo Arrivato


Prov.: Brescia
Città: lonato


45 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2009 : 14:20:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mikymiky  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di mikymiky Invia a mikymiky un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
1. amminoacil tRNA sintetasi: aa viene prima adenilato e poi legato al tRNA
2. in che senso metodi? sonde radioattive o fluorescenti!
3. crossing over! importanza per la variabilità e l'evoluzione
Torna all'inizio della Pagina

omega3
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2009 : 16:23:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di omega3 Invia a omega3 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da GfCampione

2. Quali sono i metodi di marcatura delle sonde oligonucleotidiche ??




Conosco vari metodi per la marcatura radioattiva degli oligonucleotidi:

1) Marcatura terminale al 5'
a) inserisco una fosfatasi rimuove i gruppi fosfato alle due estremità 5'
b) inserisco una polinucleotide chinasi insieme a dei [gamma fosforo 32-dATP], ovvero delle dATP che portano un fosforo 32 in posizione gamma.
Quaesta polinucleotide chinasi aggiunge alle estremità 5' dell'oligonucleotide i gruppi fosfato donati dalla dATP radioattia.


2) Marcatura terminale al 3'

a) inserisco una terminal trasferasi e delle [alfa fosforo 32-dATP]
Notare che questa volta il fosfato marcato è quello in posizione alfa, cioè quello coinvolto nel legame fosfodiesterico)
b) la terminal trasferasi trasferisce all'estremità 3' dell'oligonucleotide queste dATP radioattive

3) Random Priming

a) Si utilizzano esameri random, cioè primer di 6 nucleotidi e quindi aspecifici, che si legano in modo casuale.
b) Inserisco delle dna polimerasi particolari, dette "frammenti di klenow", insieme alle [alfa fosforo 32-dNTP]
Il frammento di Klenow è una dna polimerasi I a cui è stata tolta l'attività esonucleasica 5'-3', quindi quando procede nella polimerizazione e incontra un altro primer, questa non lo mangia ma si arresta.

4) Nick Translation

Questa volta si sfrutta proprio l'attività esonucleasica 5'-3' della dna polimerasi I.
a) A bassa concentrazione enzimatica e in presenza di ioni magnesio bivalenti, la DNAasi I introduce interazioni a singolo filamente (nicks)
b) La presenza di un nick fornisce alla dna polimerasi I l'estremità 3'-OH di cui ha bisogno
c) La dna polimerasi I polimerizza un nuovo filamente (ovviamente ho inserito anche stavolta le famose dNTP radioattive) e man mano che procede nella sintesi mangia il filamento che ha davanti.


Sia nel random priming che nella nick translation posso decidere quanto "calda" deve essere la sonda, semplicemento scegliendo di usare solo un certo tipi di nucleotide marcato, oppure due, oppure tre, oppure infine tutti e 4.
Torna all'inizio della Pagina

Schuldiner86
Utente Junior

Biotech

Prov.: Viterbo
Città: Bologna


581 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2009 : 16:25:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Schuldiner86  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Schuldiner86  Invia a Schuldiner86 un messaggio Yahoo! Invia a Schuldiner86 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
GfCampione, per la 1 la risposta l'hai già avuta su un altro post.
Per la 2 ci sono nick translation, random priming, terminal transferasi, fosfatasi/polinucleotide chinasi, trascrizione in vitro, fago M13 e sintesi chimica. Puoi usare nucleotidi marcati radioattivamente o non con ad esempio biotina.
La 3 si parla di crossing over, trasposoni e retrotrasposoni.



Torna all'inizio della Pagina

GfCampione
Nuovo Arrivato


Prov.: Palermo
Città: Perugia


36 Messaggi

Inserito il - 07 luglio 2009 : 17:20:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GfCampione  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GfCampione  Invia a GfCampione un messaggio Yahoo! Invia a GfCampione un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille a tutti..... Grazie mattè ;)
Torna all'inizio della Pagina
  Discussione  

Quanto è utile/interessante questa discussione:

 Nuova Discussione  Nuovo Sondaggio Nuovo Sondaggio
 Rispondi Aggiungi ai Preferiti Aggiungi ai Preferiti
Cerca nelle discussioni
Vai a:
MolecularLab.it © 2003-18 MolecularLab.it Torna all'inizio della Pagina