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 Westernblot: elettroforesi PAGE o SDS-PAGE?
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Smichel
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36 Messaggi

Inserito il - 09 maggio 2010 : 16:41:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Smichel Invia a Smichel un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve,
ho un dubbio sulla tecnica del western blot.
Se lo scopo del Western blot è identificare la mia proteina di interesse tramite un anticorpo, come fa l'anticorpo a legarsi alla proteina se questa è stata denaturata dall'ellettroforesi SDS-PAGE?
Non bisognerebbe fare una elettroforesi NON denaturante per conservare la struttura della proteina e quindi gli eventuali epitopi riconusciuti dall'anticorpo e formati dal ripiegamento della catena di amminoacidi?

Grazie.

SpemannOrganizer
Utente

Spemann

Città: Los Angeles


955 Messaggi

Inserito il - 09 maggio 2010 : 17:03:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di SpemannOrganizer Invia a SpemannOrganizer un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In genere la porzione riconosciuta dall'anticorpo è relativamente piccola e costituita da amminoacidi contigui e quindi la denaturazione non influisce più di tanto. A volte però l'anticorpo riconosce un particolare folding della proteina, magari costituito da porzioni e quindi amminoacidi relativamente distanti nella sequenza primaria, ma che si trovano vicini dopo il ripiegamento. In questi casi si fa una elettroforesi in condizioni non denaturanti come tu stesso suggerivi
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Smichel
Nuovo Arrivato



36 Messaggi

Inserito il - 09 maggio 2010 : 17:13:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Smichel Invia a Smichel un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ah ok allora è indifferente fare una o l'altra, ma si fa di solito quella denaturante per dividere meglio le proteine per il proprio peso molecolare, giusto?
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