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_pietro_
Nuovo Arrivato
Cittā: Lund
104 Messaggi |
 Inserito il - 12 ottobre 2010 : 11:02:48
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Buongiorno a tutti,
qui nel sud della Svezia la giornata e' fantastica (tanto che non sembra Scandinavia) e mi presento con la voglia di risolvere un piccolo stupido problema che mi ha messo un filino d'ansia:
ho degli anticorpi (sia primari sia secondari HRP-conjugated) che sono una bomba. Diluirli, diciamo, 1:5000-10000, e' ok, ma quando la diluizione sale a valori tipo 1:50000 finisce che spreco un po' di anticorpo e un po' di latte (che non e' caro, ma chissene..). La situazione e' che dovrei diluire/aliquotare il mio anticorpo a piacimento, nel modo che poi mi rende piu' semplice la diluizione finale. La domanda é: in quale solvente/buffer? TBS? PBS? Millipore water?
Un giorno provai a diluirne un aliquota di un anticorpo e smise di funzionare.
Any suggestion?
Tack så mycket allihoppa 
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2010 : 15:12:26
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allora,io uso IG della cellsignaling, dove c'č scrittoc in modo chiaro "do not aliquot the antibody"...
il mio consiglio č quindi questo:
invece di prepare aliquote. fai una normale diluizione dell IG in TBS-T\PBS-T BSA o latte (a seconda di cosa richiede il tuo IG) e da quello poi preleva per diluire ulteriormente sempre nella stessa soluzione di diluizione dell IG per ottenere la concentrazione che cerchi.
Ciao
Daria |
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chick80
Moderatore
Cittā: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2010 : 15:20:51
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In realtā dipende. Molte compagnie consigliano di aliquotare per evitare congelamenti/scongelamenti...
Ad ogni modo noi spesso diluiamo gli anticorpi 1:2 in glicerolo. |
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_pietro_
Nuovo Arrivato
Cittā: Lund
104 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2010 : 16:00:22
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Citazione:
Messaggio inserito da Daria85
allora,io uso IG della cellsignaling, dove c'č scrittoc in modo chiaro "do not aliquot the antibody"...
il mio consiglio č quindi questo:
invece di prepare aliquote. fai una normale diluizione dell IG in TBS-T\PBS-T BSA o latte (a seconda di cosa richiede il tuo IG) e da quello poi preleva per diluire ulteriormente sempre nella stessa soluzione di diluizione dell IG per ottenere la concentrazione che cerchi.
Ciao
Daria
Ciao Daria,
grazie del consiglio. In effetti vedo che alcune ditte consigliano un particolare buffer per diluire/aliquotare, ma non tutte lo fanno per cui vado un po' in crisi. Come ho scritto, una volta ho diluito un'aliquota di un anticorpo (scaione in effetti) in millipore water e ha smesso di funzionare. |
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_pietro_
Nuovo Arrivato
Cittā: Lund
104 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2010 : 16:02:44
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
In realtā dipende. Molte compagnie consigliano di aliquotare per evitare congelamenti/scongelamenti...
Ad ogni modo noi spesso diluiamo gli anticorpi 1:2 in glicerolo.
Dici Glicerolo 87%?
E se volessi diluire di piu'? Tipo fra 1:5-20?
che sostanzialmente il mio problema non e' tanto lo scongelamento, e' il non voler sprecare l'anticorpo. |
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chick80
Moderatore
Cittā: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2010 : 16:23:17
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Citazione:
Dici Glicerolo 87%?
guarda, non l'ho mai fatto personalmente... domani chiedo alla nostra tecnica.
Citazione:
E se volessi diluire di piu'? Tipo fra 1:5-20?
Non saprei dirti. Mi sa che l'unica č provare a fare qualche aliquota e vedi se funziona. Credo sia molto anticorpo-dipendente. |
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_pietro_
Nuovo Arrivato
Cittā: Lund
104 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2010 : 16:56:58
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Si, lo credo anch'io in effetti.. se solo lo scrivessero tutte le ditte sul datasheet come trattarli sti anticorpi... 
Grazie dei consigli  |
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Come diluire anticorpi?
Didattica
