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Dr Lopez
Utente Junior

Phil


141 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2012 : 11:40:36  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dr Lopez Invia a Dr Lopez un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi! Allora sarei molto grato a chiunque possa darmi un chiarimento in merito al sequenziamento chimico... Dunque ho preso le quattro aliquote del DNA a singolo filamento marcato radioattivamente all'estremitā 5' e le ho poste nelle quattro differenti provette contenenti ciascuna piperidina + DMS o idrazina. Ma a questo punto, come cavolo faccio a essere certo che il DNA non venga tagliato sempre nel medesimo punto?? Mi spiego meglio... Facendo conto che la sequenza da scoprire sia CGATGATCCGTT, e ponendo l'attenzione sulla provetta in cui il DNA č tagliato in corrispondenza di G, nei libri si dice che troverō un frammento CGATGATCC, quello successivo CGAT, e quello successivo ancora C. Ma come faccio a essere sicuro di non ottenere solo frammenti CGATGATCC??? o solo CGAT??? Spero di essere stato chiaro... grazie mille...

0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2012 : 11:59:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per una semplice ragione statistica. Hai miliardi di molecolare, non ha sensp supporre che il taglio avvenga in un solo punto.

So, forget Jesus. The stars died so that you could be here today.
A Universe From Nothing, Lawrence Krauss

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Dr Lopez
Utente Junior

Phil



141 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2012 : 12:04:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dr Lopez Invia a Dr Lopez un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Anche nel libro parlava di una questione statistica, ma non mi convinceva molto... Scusa approfitto della tua gentilezza per chiederti un altro piccolo chiarimento... Ma in ognuna delle 4 provette quindi ho tantissime copie del DNA iniziale marcato da sequenziare, giusto??
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0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2012 : 12:14:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Certo, d'altronde considera che siamo in ambito chimico. Anche se avessi una picomole di DNA, concentrazione molto bassa citata per estremizzare, avresti comunque 6x10^11 molecole di DNA, ossia oltre 100 miliardi di molecole. Tieni inoltre in considerazione che č possibile regolare la quantitā di reagenti ed il tempo della reazione, di modo da incrementare le probabilitā di rottura. D'altra parte non bisogna esagerare: si deve fare in modo di ottenere una sola rottura per molecola per poter effettuare il sequenziamento.

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Dr Lopez
Utente Junior

Phil



141 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2012 : 12:21:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dr Lopez Invia a Dr Lopez un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ti ringrazio molto... Sono solo all'inizio del mio percorso e molte cose sono ancora oscure per me... Grazi mille della disponibilitā, buona giornata :)
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0barra1
Utente Senior

Monkey's facepalm

Cittā: Paris, VIIčme arrondissement


3847 Messaggi

Inserito il - 09 luglio 2012 : 13:22:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 0barra1 Invia a 0barra1 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Figurati, alcuni punti di vista si acquisiscono con il tempo e l'esperienza. Ci arriverai.
Buona giornata anche a te


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Marshepherd
Nuovo Arrivato

io



22 Messaggi

Inserito il - 28 aprile 2014 : 23:29:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marshepherd Invia a Marshepherd un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, scusate, ma come faccio a ottenere un filamento singolo marcato?
se parto da un duplex, e marco l'estremitā 5', poi denaturo la molecola per ottenere due filamenti singoli, ma come sono sicuro che nelle provette uso solo uno dei due filamenti?
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