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zelos1
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: Palermo
31 Messaggi |
 Inserito il - 08 febbraio 2013 : 14:19:08
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Salve
Avete idea di cosa possa essere la banda più alta riconosciuta da questo anticorpo? L'unica cosa che mi viene in mente è un dimero, ma il gel è denaturante, faccio stare i campioni a 98 gradi per 5' prima di caricare..non saprei.
Grazie in anticipo, qui il link con le bande presentate dalla abcam utilizzando questo ab.
http://www.abcam.com/THAP11-antibody-3F3-ab104842.html#description_images_2
Immagine:
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Mat
Nuovo Arrivato
85 Messaggi |
Inserito il - 08 febbraio 2013 : 16:44:27
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| Potresti dare qualche delucidazine in più? Tipo se in letteratura è riportato se la tua proteina dimerizza, sei sicro che l'anticorpo sia altamente specifico, possono esserci epitopi simili nel campione caricato? |
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zelos1
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: Palermo
31 Messaggi |
Inserito il - 11 febbraio 2013 : 13:54:08
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Thap 11 sembra che non dimerizzi, l'unica proteina con cui interagisce è HCF1
http://www.uniprot.org/uniprot/Q96EK4
L'anticorpo è un monoclonale, quindi "in teoria" altamente specifico, anche se posso dirti che da parecchio aspecifico, sembra un marker..
E' interessante anche sapere che la Abcam,che produce questo anticorpo, segna come banda di THAP11 tra le due principali quella più bassa, mentre le altre ditte la banda superiore.
L'altezza della banda indicata dalle diverse case produttrici varia dai 45 Kda fino ai 60 circa.
Il problema principale è che attorno ai 42Kda cade anche la banda della B-actina, che copre qualunque segnale limitrofo, il primario anti THAP11 è un mouse, secondario anti mouse, temo che cmq si veda sempre la banda della beta actina, e che la banda reale sia quella più alta.
La proteina dovrebbe avere un peso di 34Kda, ma tra glicosilazioni e uso l'uso dei gel precast (le bande dei campioni sembrano essere sempre più alte) non mi stupirei se arrivasse intorno ai 70 Kda..
Non so, devo provare con un gel a gradiente 4-12% e vedere di separare di + le bande
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zelos1
Nuovo Arrivato
Prov.: Palermo
Città: Palermo
31 Messaggi |
Inserito il - 11 febbraio 2013 : 13:57:02
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| scusate la ditta è la Abnova, non abcam. |
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