Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
alelongoni
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 15 giugno 2013 : 21:47:13
|
Ciao ragazzi! Sto leggendo un articolo e non capisco una cosa...
in sostanza gli autori creano un costrutto che poi verrà iniettato in oociti fertilizzati di ratto. In sostanza il costrutto contiene al 5' l'early enhancer element di CMV e il chicken beta actin promoter. Poi hanno messo un miRNA dentro un introne che dovrebbe silenziare una proteina nel SNC e la sequenza per la EGFP che verrà trascritta insieme al miRNA per vedere quanto miRNA è presente nelle cellule e dove. La cosa che mi turba è che l'espressione di EGFP gli autori la vedono praticamente quasi solo nei neuroni e non negli oligodendrociti o in altri tipi cellulari. Non capisco come questo sia possibile senza usare un promotore specifico o senza fare detargeting. Qualcuno mi sa dare una spiegazione?
Grazie mille!
|
|
|
|
|
zerhos
Utente Junior
Prov.: Pisa
Città: Pisa
421 Messaggi |
Inserito il - 16 giugno 2013 : 11:49:09
|
| probabilmente perchè non è un promotore specie specifico. Promotori come il CMV o il CAG tendono ad essere silenziati, sopratutto nel sistema nervoso, e questa è una cosa risaputa. Quando tu dici "...e negli altri tipi cellulari...", ti riferisci ancora al sistema nervoso, o anche a gli altri tessuti? |
"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!"
Salvador.Dalì
|
 |
|
|
alelongoni
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 16 giugno 2013 : 12:50:22
|
| loro fanno vedere invece che nei neuroni è molto espresso mentre è quasi completamente assente in oligodendrociti, interneuroni e vasi.. |
|
|
|
SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 16 giugno 2013 : 20:09:46
|
forse se ci dici che articolo è possiamo aiutarti meglio
|
 |
|
|
|
alelongoni
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2013 : 09:05:09
|
Synthetic microRNA-mediated downregulation of Nogo-A in transgenic rats reveals its role as regulator of synaptic plasticity and cognitive function
Björn Tewsa, Kai Schönigc, Michael E. Arzta, Stefano Clementic, Mengia-Seraina Rioult-Pedottid, Ajmal Zemmara,Stefan M. Bergerc, Miriam Schneiderf, Thomas Enkelc, Oliver Weinmanna, Hansjörg Kaspera, Martin E. Schwaba,and Dusan Bartschc
Grazie mille!
Allegato:  PNAS 1.pdf
1481,06 KB |
|
|
|
SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 17 giugno 2013 : 23:04:05
|
Allora, diciamo anzitutto che nel paper non vi e' spiegazione per questa differenza di espressione nelle varie cellule del CNS. Almeno, io non ho trovato alcuna spiegazione, ma tengo a precisare che ho letto solo parzialmente il paper in quanto non mi interessa.
Ad ogni modo l'effetto di cui parli loro lo osservano in una linea, la L2 che e' la piu' forte in termini di espressione; non credo riportino simili effetti nelle altre linee generate. Almeno due sono le possibili causee, secondo la mia esperienza: o CAG non e' omogeneo in termini di espressione (il che potrebbe essere vero: CAG e' un ibrido tra CMV e Actin promoters; CMV e' espresso ubiquitamente ma non allo stesso livello in tutte le cellule, cioe' la sua espressione non e' omogenea.). Oppure, verosimilmente, quello nella L2 e' un effetto posizionale.
Cio' che mi lascia perplesso di tutto il paper e' che, a questo punto, avrebbero potuto usare un promotore specifico, credo, ma soprattutto il fatto che Nogo-A e' espressa in oligodendrociti e una sub-population di neuroni, mentre loro fanno un knock-down in neuroni (e la maggior parte di oligodendrociti sono negativi per l'espressione del transgene...).
Saluti |
|
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
problemi di costrutti!
Didattica
