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AccettoreQ
Nuovo Arrivato
Prov.: Reggio nell'Emilia
Città: Reggio Emilia
57 Messaggi |
 Inserito il - 09 novembre 2014 : 12:17:37
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All'interno dei plasmidi può essere inserito un gene per la luciferasi (enzima che porta alla formazione della luciferina, proteina che emette fluorescenza). Non capisco però secondo quale criterio avviene il suo utilizzo:
-si considerano quali batteri hanno assorbito il plasmide in base alla presenza di fluorescenza o meno;
-oppure se il gene viene inserito all'interno del gene della luciferasi, inattivandola (e, quindi non ci sarà fluorescenza).
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"Non esiste un gene per il destino"
dal film "Gattaca. La porta dell'universo" |
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midichloria
Nuovo Arrivato
75 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2014 : 12:28:52
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Non so quale sia lo scopo del tuo esperimento. Pensando alle varie opzioni, credo sia la prima: solo i batteri contenenti il plasmide produrranno luciferina.
Nel secondo caso, inserendo un gene di interesse all'interno del gene della luciferasi, questa non verrebbe prodotta. Ma trasformando i batteri e basandoti solo sulla presenza o meno di fluorescenza senza usare un antibiotico contenuto nel plasmide peró non sapresti se i batteri non producono fluorescenza perché il tuo gene di interesse é stato effettivamente inserito all'interno della luciferasi o se sono privi di plasmide. Se invece usi terreno selettivo con antibiotico per il quale il plasmide contiene il gene di resistenza, il fatto di avere o meno fluorescenza dovrebbe teoricamente dirti se il tuo gene é stato inserito o meno. Ma non mi convince molto... Se per esempio hai usato due enzimi di restrizione differenti per inserire il tuo gene, ma il vettore si é richiuso senza inserto, avresti cosí deleto una parte del gene della luciferasi che potrebbe a quel punto non essere piú prodotta o dare un prodotto non funzionante, dandoti un falso positivo.
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ErgoCalciferolo
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70 Messaggi |
Inserito il - 22 novembre 2014 : 01:03:31
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Citazione:
Messaggio inserito da AccettoreQ
All'interno dei plasmidi può essere inserito un gene per la luciferasi (enzima che porta alla formazione della luciferina, proteina che emette fluorescenza).
Siete sicuri che la luciferasi "forma" la luciferina?
Siete sicuri che la luciferina sia una proteina?
Siete sicuri di non aver fatto confusione tra "fluorescenza" e "bioluminescenza"? |
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chick80
Moderatore
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11491 Messaggi |
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AccettoreQ
Nuovo Arrivato
Prov.: Reggio nell'Emilia
Città: Reggio Emilia
57 Messaggi |
Inserito il - 07 dicembre 2014 : 23:49:19
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Citazione:
Messaggio inserito da midichloria
Non so quale sia lo scopo del tuo esperimento. Pensando alle varie opzioni, credo sia la prima: solo i batteri contenenti il plasmide produrranno luciferina.
Nel secondo caso, inserendo un gene di interesse all'interno del gene della luciferasi, questa non verrebbe prodotta. Ma trasformando i batteri e basandoti solo sulla presenza o meno di fluorescenza senza usare un antibiotico contenuto nel plasmide peró non sapresti se i batteri non producono fluorescenza perché il tuo gene di interesse é stato effettivamente inserito all'interno della luciferasi o se sono privi di plasmide. Se invece usi terreno selettivo con antibiotico per il quale il plasmide contiene il gene di resistenza, il fatto di avere o meno fluorescenza dovrebbe teoricamente dirti se il tuo gene é stato inserito o meno. Ma non mi convince molto... Se per esempio hai usato due enzimi di restrizione differenti per inserire il tuo gene, ma il vettore si é richiuso senza inserto, avresti cosí deleto una parte del gene della luciferasi che potrebbe a quel punto non essere piú prodotta o dare un prodotto non funzionante, dandoti un falso positivo.
Nessun esperimento particolare, sono uno studente e sto affrontando questi argomenti dal punto di vista teorico, ho aperto questa discussione per avere più chiarezza sull'applicazione pratica. |
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AccettoreQ
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Prov.: Reggio nell'Emilia
Città: Reggio Emilia
57 Messaggi |
Inserito il - 07 dicembre 2014 : 23:51:40
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Citazione:
Messaggio inserito da ErgoCalciferolo
Citazione:
Messaggio inserito da AccettoreQ
All'interno dei plasmidi può essere inserito un gene per la luciferasi (enzima che porta alla formazione della luciferina, proteina che emette fluorescenza).
Siete sicuri che la luciferasi "forma" la luciferina?
Siete sicuri che la luciferina sia una proteina?
Siete sicuri di non aver fatto confusione tra "fluorescenza" e "bioluminescenza"?
Purtroppo no, non ho tutte queste sicurezze. Potresti aiutarmi ad averle? |
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midichloria
Nuovo Arrivato
75 Messaggi |
Inserito il - 09 dicembre 2014 : 15:29:24
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| La luciferasi é un enzima che ha la funzione di ossidare la luciferina, che é un pigmento, portando alla produzione di luce, utilizzando anche una molecola di ATP nella reazione. Il processo é definito bioluminescenza, non fluorescenza (se non erro, nella fluorescenza la sostanza assorbe a una certa lunghezza d'onda e riemette a una lunghezza d'onda maggiore, nella bioluminescenza invece si ha produzione e emissione di luce in seguito a una reazione chimica). |
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Discussione |
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Funzione luciferasi
Didattica
