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ila91
Nuovo Arrivato

Città: siena


17 Messaggi

Inserito il - 14 novembre 2014 : 18:16:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ila91 Invia a ila91 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti, devo fare un time lapse a zebrafish ma non so a che lunghezza d'onda e ogni quanto tempo devo impostare le scansioni per vedere la migrazione dei neuroni. qualcuno di voi l'ha mai fatto??

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2014 : 11:34:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
non so a che lunghezza d'onda


Questo lo devi sapere tu... dipende da che fluoroforo stai usando...

Citazione:
ogni quanto tempo devo impostare le scansioni per vedere la migrazione dei neuroni.


Devi considerare vari fattori. La prima cosa da fare è ovviamente leggere la letteratura e cercare di capire quanto dura il processo che vuoi guardare.
La migrazione neuronale a naso dura varie ore/giorni (ma non sono sicuro, controlla). Se fosse così direi che fare delle scansioni overnight*, ogni 20-30 minuti può essere una buona idea.
Dovrai tuttavia assicurarti di avere un buon microscopio e soprattutto una buona preparazione. Scansioni così lunghe rischiano di andare fuori fuoco mano a mano che procedono per problemi quali l'evaporazione del medium, cambi di temperatura, problemi intrinsechi del microscopio etc. Ed ovviamente, immagino che avrai preso tutte le precauzioni per immobilizzare lo zebrafish...

*L'overnight in realtà non è strettamente necessario se sei l'unica persona ad usare il microscopio. In caso contrario è più che altro per gentilezza verso gli altri utilizzatori che non si ritrovano il microscopio occupato tutta la giornata.

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ila91
Nuovo Arrivato

Città: siena


17 Messaggi

Inserito il - 15 novembre 2014 : 12:13:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ila91 Invia a ila91 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da chick80

Citazione:
non so a che lunghezza d'onda


Questo lo devi sapere tu... dipende da che fluoroforo stai usando...

Citazione:
ogni quanto tempo devo impostare le scansioni per vedere la migrazione dei neuroni.


Devi considerare vari fattori. La prima cosa da fare è ovviamente leggere la letteratura e cercare di capire quanto dura il processo che vuoi guardare.
La migrazione neuronale a naso dura varie ore/giorni (ma non sono sicuro, controlla). Se fosse così direi che fare delle scansioni overnight*, ogni 20-30 minuti può essere una buona idea.
Dovrai tuttavia assicurarti di avere un buon microscopio e soprattutto una buona preparazione. Scansioni così lunghe rischiano di andare fuori fuoco mano a mano che procedono per problemi quali l'evaporazione del medium, cambi di temperatura, problemi intrinsechi del microscopio etc. Ed ovviamente, immagino che avrai preso tutte le precauzioni per immobilizzare lo zebrafish...

*L'overnight in realtà non è strettamente necessario se sei l'unica persona ad usare il microscopio. In caso contrario è più che altro per gentilezza verso gli altri utilizzatori che non si ritrovano il microscopio occupato tutta la giornata.


la faccio overnight perché oltre ad essere sempre occupato, la scansione durerà 12 ore e ovviamentente non posso occuparlo per tutto il giorno solo io.
purtroppo nessuno ha mai fatto un time lapse su questi neuroni ma semplicemente delle foto al confocale per questo la letteratura mi è poco utile, ma ho trovato che per il pathfinding assonale più o meno fanno scansioni ogni 15 min però guardano tipi neuronali devesi quindi non so quanto varia la velocità migrazione. Per quanto riguarda le variabili microscopio e immobilizzazione dei pesci non ci sono problemi, l'unico dubbio è la frequenza delle scansioni.
Penso che a questo punto proverò ogni 20 min, se esce qualcosa bene altrimenti riproverò.
ora che ci penso non ho controllato se qualcuno ha fatto un time lapse per la rostral migratory stream degli zebrafish, ammettendo che ce l'abbiano, magari può esser simile..
Grazie mille chick
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