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Tag   PCR    diluizioni    esercizio  Aggiungi Tag

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AboutAGirl
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1 Messaggi

Inserito il - 15 marzo 2015 : 19:22:39  Mostra Profilo Invia a AboutAGirl un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Buonasera...
ho letto tutte le discussioni riguardo alle diluzioni... ma non ci posso fare nulla qualcosa mi sfugge nel ragionamento... non so se è colpa mia o altro...

Se ho una soluzione di DNA a concentrazione di 210 ng/microlitro e devo ottenere una soluzione a 50 ng/microlitro... come faccio?
Io sono abituata ad usare la formulina C1V1=CfV1... ma qui non mi torna... so solo che dalla soluzione madre devo prelevare 2 microlitri per evitare di fare errori.

Grazie mille

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 16 marzo 2015 : 10:24:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Prendiamo una situazione più semplice, in cui hai una soluzione stock a 200ng/ml.

200 ng/ul sono 4 volte 50 ng/ul (200/50=4)
Dovrai dunque diluire la soluzione 4 volte, ossia ti servirà 1/4 del volume finale di DNA.
Quindi se vuoi 10 ul finali ti serviranno 2.5 (=10/4) di DNA e il resto (10-2.5=7.5) sarà H2O (o TE o il solvente che vuoi tu).

----

Ora facciamo il calcolo con 210: 210/50=4.2
Dovrai diluire 4.2 volte.
Quindi se vuoi 10ul finali prenderai 10/4.2 = 2.38 ul di DNA, ed il resto (ossia 10-2.38=7.62) di solvente.

2.38 è un po' meno di quello che avevamo calcolato con 200, che è quello che ci attendiamo: essendo la soluzione madre più concentrata ne dovrò usare di meno per ottenere la stessa concentrazione.

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