Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
janisfree
Nuovo Arrivato
29 Messaggi |
 Inserito il - 29 giugno 2015 : 22:46:15
|
Buonasera,
devo cotrasfettare due plasmidi all'interno di alcune cellule, seguendo il protocollo della Trasfectina.
Sul datasheet trovo le informazioni relative ad un DNA, che prevedeno, per esempio per le piastra da 6 well, di dividere in due eppendorf il medium, in una aggiungerci il DNA e nell'altra l'enzima.
Dopo cinque minuti si mescolano le due eppendorf, si aspettano altri 5 minuti e poi si mette la soluzione nella coltura cellulare.
La mia domanda è: e se ho due DNA diversi? Ripeto la stessa procedura, separatamente per ciascun DNA, oppure devo mettere i due DNA insieme con il medium, aspettare cinque minuti, mescolarli con la seconda eppendorf che contiene la trasfectina?
Io a logica opterei per la prima, perché credo che con la seconda si abbassi l'efficienza della trasfezione... sbaglio?
|
|
|
|
|
domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
|
|
janisfree
Nuovo Arrivato
29 Messaggi |
Inserito il - 30 giugno 2015 : 11:05:38
|
| Quindi, se nel protocollo dicono di avere per ogni well, 2 ug di DNA, potrei metterne 1 ug di DNA1 e 1 ug di DNA2 (supposto che abbiano la stessa efficienza di trasfezione)? |
 |
|
|
Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
 Inserito il - 30 giugno 2015 : 18:03:08
|
 Scritto da MolecularLab Mobile
Nel protocollo di qualsiasi trasfezione si indica la quantitá totale di DNA da usare in termini di ug. Anche se tu dovessi usare un solo plasmide di tuo interesse non saresti costretto a doverne usare per forza 1ug come da protocollo. Potresti volerne usare di meno, per esempio solo 200ng del tuo plasmide. In quel caso allora per arrivare a 1ug di DNA totale devi includere nella mix anche del DNA di riempimento che ovviamente presupponi non sortisca alcun effetto al tuo saggio (come un plasmide batterico vuoto). Quindi nel tuo caso puoi benissimo usare due, tre o più plasmidi diversi da cotrasfettare rientrando comunque nel 1ug totale. Come hai suggerito ovviamente se dimezzi la quantitá del DNA n°1 puoi aspettarti un efficienza di trasfezione dimezzata per quel plasmide, o forse no perchè magari con 1ug solo del plasmide n°1 eri giá a saturazione per quello che volevi vedere. |
|
|
|
|
janisfree
Nuovo Arrivato
29 Messaggi |
Inserito il - 01 luglio 2015 : 15:21:59
|
Grazie mille Geeko, sei stato chiarissimo |
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-18 MolecularLab.it |
|
|
|
Cotrasfezione
Didattica
