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giuliariv22
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 09 febbraio 2018 : 16:41:03
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Buongiorno a tutti,
vi chiedo di aiutarmi con questo esercizio che devo preparare per un esame: devo misurare la concentrazione proteica di un campione incognito x e svolgere il saggio con la metodica di Bradford in triplicato sul campione incognito x e su una serie standard a concentrazione nota. Di questa serie standard mi vengono dati i valori di concentrazione e assorbanza,mentre per il campione x mi vengono dati solo i tre valori di assorbanza. Come faccio a calcolare la epsilon?
Ho provato a calcolare la epsilon dagli altri valori che mi sono stati dati ma il risultato è sempre diverso.
Grazie mille
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 09 febbraio 2018 : 22:14:40
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Benvenuta sul forum.
Ti sta sfuggendo qualcosa. Il coefficiente di estinzione molare (che cambia da proteina a proteina) lo devi calcolare se hai misurato l'assorbanza a 280 nm di una proteina purificata, hai bisogno della sequenza proteica (per quello teorico) e non hai bisogno di uno standard.
La metodica di Bradform richiede l'assorbanza a 595 nm, ha bisogno di un campione a concentrazione nota e non richiede il calcolo del coeff di estinzione molare.
Graficamente: crei un grafico con la concentrazione su un asse, l'assorbanza sull'altro, disegni i punti del tuo campione noto, tracci la retta, e dall'assorbanza del tuo campione incognito ne ricavi la concentrazione intercettando la retta.
Matematicamente: come prima disegni la retta, calcoli la formula della retta (y=ax+b), e con questa calcoli il tuo campione incognito.
Dai un occhio anche qui:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=12336
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Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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Geeko
Utente
Città: Milano
1043 Messaggi |
Inserito il - 09 febbraio 2018 : 23:17:20
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| In linea teorica sarebbe possibile derivare il coefficiente di estinzione molare a partire da una preparazione pura di proteina, di cui si misura la concentrazione usando il Bradford. Il passaggio intermedio è misurare anche l'assorbanza a 280nm dello stesso campione proteico, e poi applicare la legge di Lambert-Beer per calcolare la epsilon. Per fare ciò però devi conoscere il peso molecolare della tua proteina per convertire la concentrazione espressa come peso/volume in molarità, quindi o ne conosci la sequenza oppure devi stimarlo usando altre tecniche analitiche. |
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giuliariv22
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 11 febbraio 2018 : 18:43:06
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| Sono riuscita con il grafico,grazie mille!! |
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calcolo coeff.di estinzione molare assorbanza
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