preparazione campione per sequenziamento

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Autore

Discussione

sere85
Nuovo Arrivato

Prov.: Bologna
Città: monterenzio

29 Messaggi

Inserito il - 07 maggio 2007 : 13:02:53

ciao!!!! volevo chiedervi se qualcuno di voi riusciva a spiegarmi la preparazione dei campioni necessaria per predisporli al sequenziameto in altra sede! grazie mille

Soltanto chi non ha approfondito nulla può avere delle convinzioni.
Emil Cioran

valia
Moderatore

Prov.: UK

1001 Messaggi

Inserito il - 07 maggio 2007 : 13:40:36

Tutto dipende da che "altra sede" usi...
Vai nel sito del centro di sequenziamento, di solito ci sono indicazioni precise sulla preparazione dei campioni.

sere85
Nuovo Arrivato

Prov.: Bologna
Città: monterenzio

29 Messaggi

Inserito il - 07 maggio 2007 : 18:38:49

si hai ragione mi sono espressa male!!! visto che dove effettuo il tirocinio non c'è più la macchina per il sequenziamento perchè si è rotta prepariamo i campioni che poi verranno inviati a roma per ottenere la sequenza. Non ho capito come si preparano i campioni che verranno inviati.

mi puoi segnalare il sito del centro sequenziamento? grazie mille

Soltanto chi non ha approfondito nulla può avere delle convinzioni.
Emil Cioran

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 07 maggio 2007 : 22:51:21

Beh... immagino ci siano molti centri di sequenziamento a Roma. Suppongo avrai un nome/indirizzo del posto dove lo mandate.

Di solito excidi la banda dal gel, poi fai un'estrazione del DNA dall'agarosio e glielo mandi in TE, ma dipende da come lo vogliono loro.

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moonycinzia
Utente Junior

234 Messaggi

Inserito il - 07 maggio 2007 : 23:59:43

Citazione:
Messaggio inserito da sere85

si hai ragione mi sono espressa male!!! visto che dove effettuo il tirocinio non c'è più la macchina per il sequenziamento perchè si è rotta prepariamo i campioni che poi verranno inviati a roma per ottenere la sequenza. Non ho capito come si preparano i campioni che verranno inviati. mi puoi segnalare il sito del centro sequenziamento? grazie mille

In genere se devi sequenziare un gene clonato in un plasmide basta che segui le norme della ditta che effettua il sequnziamento.Ti chiedono una certa quantità di primer8 che avrai preventivamente fatto sintetizzare);i primer in genere sono più di uno per ottenere l'intera equnza del gene;poi chiedono una certa quantità del tuo dna plassmidico ed il reso ad acqua.Ttutto in tubi da pcr e in una falcon
Buon lavoro

cin
Utente Junior

Prov.: Padova
Città: Padova

558 Messaggi

Inserito il - 09 maggio 2007 : 14:44:42

Noi dopo aver fatto la PCR di sequenza, purifichiamo con le MICROCON della MILLIPORE, dopo la purificazione aggiungiamo 5ul di formamide e se vengono caricate subito le mettiamo a +4°C, altrimenti a -20°C.
Ma siamo padovani......

Balsamo del Canadà
Nuovo Arrivato

Prov.: Verbano-Cusio-Ossola
Città: Verbania

97 Messaggi

Inserito il - 12 maggio 2007 : 18:58:17

Io ho fatto il tirocinio in svizzera e dopo aver purificato (lo facevo con filtri millipore da 0.0025 micrometri in TE) mettevo 8 microlitri di purificato con 12 di formamide.. proprio come i padovani! Mi sa che gira e rigira ma il DNA è uguale ovunque!
Il campione dava delle reazioni perfette anche dopo una settimana a +4°C.
Ciao!

-B.del C.-