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Eziad
Nuovo Arrivato

0602_da_carmilla983
Prov.: Napoli
Città: Napoli


36 Messaggi

Inserito il - 07 dicembre 2007 : 18:23:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Eziad Invia a Eziad un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ho estratto l'RNA da una biopsia ed ho ottenuto una lettura negativa!!!!!
la biopsia l'ho immersa subito in buffer di lisi in ghiaccio credo che il procedimento sia questo?!?!?
Avete un protocollo di base per l'estrazione di RNA da biopsie?


Eziad

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 07 dicembre 2007 : 21:43:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=24

http://www.protocol-online.org/prot/Molecular_Biology/RNA/RNA_Extraction/

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cin
Utente Junior

ptero

Prov.: Padova
Città: Padova


558 Messaggi

Inserito il - 08 dicembre 2007 : 08:47:32  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cin Invia a cin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Che tessuto era? Come è stato disgregato il tessuto?
La lettura dell'RNA era negativa allo spettrofotometro? Sei sicura di aver fatto la lettura correttamente? A volte ci si dimentica di moltiplicare per il fattore di diluizione.
Ho visto valori bassissimi di RNA ma negativi sinceramente no.
Quanto tempo è intercorso dal ghiaccio all'estrazione? E dall'estrazione alla lettura come è stato conservato l'RNA?
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Eziad
Nuovo Arrivato

0602_da_carmilla983

Prov.: Napoli
Città: Napoli


36 Messaggi

Inserito il - 08 dicembre 2007 : 15:08:43  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Eziad Invia a Eziad un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Era una biopsia di un soggetto affetto da ipercheratosi gengivale.
il tessuto è stato omogeneizzato ed ho ottenuto una lettura negativa allo spettrofotometro,nn ho sbagliato i calcoli ed ho effettuato l'estrazione immediatamente conservandolo in ghiaccio.
però c'è da dire che dopo la biopsia il medico nn ha messo subito il tessuto nel buffer di lisi e credo che il problema sia proprio questo.
che faccio la ripeto o proseguo nella sintesi di cDNA?
grazie

Eziad
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cin
Utente Junior

ptero

Prov.: Padova
Città: Padova


558 Messaggi

Inserito il - 10 dicembre 2007 : 12:15:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di cin Invia a cin un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se il problema dipende dal pezzo sarà difficile avere una lettura migliore in una successiva estrazione.
La cosa da fare per non gettare tempo e soldi inutilmente nel retrotrascrivere, sarebbe quella di vedere la qualità dell'RNA con il Bioanalyzer dell'Agilent ( so che ne esiste uno simile della Bio rad) , prova a chiedere nei laboratori a fianco o comunque a chi si occupa di RNA sicuramente ne hanno uno, (mal che vada puoi chiedere direttamente alle due ditte sopracitate quale istituto più vicino a te ce l'abbia) e chiedigli se ti fanno gratuitamente una corsa, non penso che nessuno ti dirà di no.
Oppure retrotrascrivi e fai un 18S.
Ma il tutto dipende da cosa ce ne devi fare dopo, anzi è fondamentale.
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