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 sds-page: problemi di migrazione
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byo_gio
Nuovo Arrivato

0211_da_bettina
Prov.: MI
Città: Milano


66 Messaggi

Inserito il - 15 agosto 2008 : 17:50:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di byo_gio Invia a byo_gio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Vi e' capitato di avere delle bande in cima al gel, come se fossero rimaste bloccate nei pozzetti e non avessero migrato?

Puo' essere dovuto a un eccessivo carico di proteine nel gel?
Puo' essere dovuto a una corsa troppo veloce? (45 min @ 150V)

Immagine:

95,21 KB

nyo84
Utente Junior


Prov.: Brescia
Città: Piancogno


239 Messaggi

Inserito il - 15 agosto 2008 : 18:45:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di nyo84 Invia a nyo84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
io intanto che sono nello stacking faccio 100 V per farle compattare bene..cmq è abb strano che ti siano rimaste proprio bloccate lì...

Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa...
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paolo865
Utente Junior


Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco


262 Messaggi

Inserito il - 15 agosto 2008 : 19:42:23  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di paolo865 Invia a paolo865 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
strano...non è che hai colato male il gel?
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byo_gio
Nuovo Arrivato

0211_da_bettina

Prov.: MI
Città: Milano


66 Messaggi

Inserito il - 15 agosto 2008 : 21:05:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di byo_gio Invia a byo_gio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
e' un precasted...
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Anyra
Utente Junior

Anyra

Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara


212 Messaggi

Inserito il - 15 agosto 2008 : 23:06:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Anyra Invia a Anyra un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Che tipo di campione sono?
Se sono estratti potrebbero essere degli aggregati.
Prova a sonicare oppure a bollire unb po' di più (5 minuti)
Comunque il gel non ha corso bene.
Io non setto il voltaggio nell'SDS PAGE, ma faccio 10-15 mA nello stacking e 20-30 mA nel Separating (per un gel, se ho 2 gel raddoppio)

Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw
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byo_gio
Nuovo Arrivato

0211_da_bettina

Prov.: MI
Città: Milano


66 Messaggi

Inserito il - 15 agosto 2008 : 23:56:08  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di byo_gio Invia a byo_gio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
le corsie 4-6-7 sono lisati normali, gli altri sono immunoprecipitazioni. Tutti sono stati bolliti 5 minuti a 100 gradi.
Questi in realta' sono dei nuovi gel che hanno pH neutro e usano un buffer con HEPES al posto della Glicina.


In realta' vorrei solo sapere se a qualcuno e' capitato che una parte del campione non migrasse ma rimanesse come bloccata nella parte superiore del gel, e se si, come si puo' risolvere la cosa.
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Anyra
Utente Junior

Anyra

Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara


212 Messaggi

Inserito il - 16 agosto 2008 : 08:23:03  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Anyra Invia a Anyra un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusa l'ovvio, ma hai fatto una SDS PAGE o un'elettroforesi senza SDS,
Che pH ha il tampone?
Se nella lane 1 hai caricato lo standard si peso molecolare anche quello non ha migrato. potrebbe essere un problema di pH.
il gel neutro non dovrebbe dare poi così grossi probemi nello stacking, normalmente si usa un pHdi 6.8 prossimo alla neutralità.
invece potrebbero esserci dei problemi con gli elettroliti.

Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw
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byo_gio
Nuovo Arrivato

0211_da_bettina

Prov.: MI
Città: Milano


66 Messaggi

Inserito il - 18 agosto 2008 : 18:28:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di byo_gio Invia a byo_gio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
e' una SDS-PAGE come dice il titolo del post.
il tampone ha pH 8 (raccomandato dalla ditta produttrice dei gel)
il gel ha pH 7
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H2O
Nuovo Arrivato




32 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2009 : 18:07:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di H2O Invia a H2O un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Di che marca è il gel?
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RM
Nuovo Arrivato



115 Messaggi

Inserito il - 10 marzo 2009 : 19:13:56  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di RM Invia a RM un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao
Prova a dare un occhiata qua:

http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/sdsgoofs.html

Ciao

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