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 Come amplificare e purificare PCR lunghe.
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Tag   PCR    purificazione    gel  Aggiungi Tag

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5ringsman
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11 Messaggi

Inserito il - 18 marzo 2015 : 23:33:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di 5ringsman Invia a 5ringsman un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Devo amplificare 3 segmenti di DNA di 7,4 e3 kb.
Per quello da 7kb, reisco facilmente ad amplificarlo da plasmide ma, dopo purificazione con kit quiagen, promega o PEG, ottendo un basso prodotto e se provo a riamplificare con un altra PCR non ottengo nulla.
Stessa storia per gli altri due frammenti amplificati da genomico... con l'aggiunta che, pur amplificando nelle medesime condizioni, a volte ottengo un prodotto e a volte no.

Cosa sbaglio?
Grazie a tutti

Uther
Nuovo Arrivato

Mastodon

Prov.: Napoli
Cittā: Na


35 Messaggi

Inserito il - 27 marzo 2015 : 12:44:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Uther Invia a Uther un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, che mi dici dei primer e delle temperature di annealing?
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