-Preparare una fiasca da 25 cm2 con 5 ml Terreno+siero

-Preparare 1 Falcon da 15 ml con 0.9 ml Terreno+siero

-Preparare 1 Falcon da 15 ml con 4 ml Terreno +siero

-Togliere il terreno dalla fiasca da tripsinizzare

-Fare un lavaggio con 5 ml Terreno+siero e gettare il mezzo

-Aggiungere 1 ml di tripsina e porre la fiasca in incubatore per 1 minuto

-Dopo aver staccato le cellule versare il contenuto nel Falcon con 4 ml Terreno+siero

-Centrifugare a 1000 rpm per 5 minuti

-Eliminare il super

-Risospendere il pellet in 1 ml di Terreno + siero

-Prelevare 0,1 ml e trasferirli nella Falcon da 0,9 ml Terreno+siero

-Utilizzare tale Falcon per la conta cellulare

-Nella Falcon del campione cellulare aggiungere 1,5 ml Terreno+siero

-In tale Falcon il volume finale sarà di 2,4 ml

-Seminare 1:3 (0,8ml) utilizzando la fiasca da 25 cm2

-Ai fini della conta cellulare prelevare 50 µlitri della Falcon (neretto), contare le cellule, moltiplicare per 104 e per il fattore di diluizione 10