determinare composizione amminoacidica

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Biotecnologie della vita quotidiana
Adriana Bazzi, Paolo Vezzoni

Darwin
John Bowlby

Il DNA incontra Facebook
Sergio Pistoi

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

Laboratorio

Tecniche

determinare composizione amminoacidica

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Tecniche di Laboratorio:

Didattica e Relazioni

InsideBlog

Siti Scientifici

Protocolli Laboratorio

Siti Scientifici

Ultime notizie

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

Morfeo
Nuovo Arrivato

Citt�: Roma

110 Messaggi

Inserito il - 30 settembre 2009 : 09:04:16

Ciao a tutti, sto studiando tra le altre cose varie metodologie biochimiche. Ho un dubbio.
Partiamo che ho la mia proteina purificata e dosata, adesso voglio identificare la composizione dei suoi amminoacidi (e dopo stabilir� la struttura primaria con la degradazione di Edman ad esempio.) A quanto ho letto si f� un idrolizzato usando HCl 6N a 110�C per 24 ore circa. Dopo, uso la cromatografia a scambio ionico, con la fase mobile costituita da un gradiente di pH e calcolo il volume di eluzione per ogni singolo aa o il tempo di ritenzione di questo sulla fase staz e mi ricavo di quali aa ho trovato. Ecco questo � il punto, la spiegazione � che io posso risalire a quali amminoacidi ho sapendo che essi hanno dei certi valori di pKa e quindi si ripartiscono in maniera differente tra la fase mobile e quella stazionaria? ma se la fase mobile � un gradiente di pH quindi

ho qualche dubbio su come spiegarlo. Poi si intende per derivatizzazione appunto che io risalgo a quali amminoacidi ho o sbaglio. Ultima cosa, dopo la cromatografia posso quantificarli usando una reazione colometrica con la ninidrina e fare una spettrometria UV, con la ninidrina assorbiranno di pi� per via della natura ciclica di questa molecola penso no? e poi mi derivo la concentrazione dall'equazione di lambert-beer in pratica. Vi ringrazio se mi date una mano e scusate se mi sono dilungato troppo!!