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Daniele430
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Inserito il - 17 aprile 2015 : 11:14:48  Mostra Profilo Invia a Daniele430 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve ragazzi vorrei chiedervi una informazione anche se sembrerà stupida come domanda. Premesso che ho delle cellule che esprimono il recettore androgeno, ora dovrei sottoporle a una serie di trattamenti e poi fare delle real time.

Vorrei effettuare delle curve standard & efficienza per il gene AR ed altri.

La mia domanda è la seguente per effettuare la curva utilizzo mRNA retrotrascritto di cellule non trattate con l'ormone endogeno? Oppure utilizzo l'mRNA retrotrascritto delle cellule trattate con l'ormone endogeno? o entrambe?

grazie

Ftoresearch
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Inserito il - 12 maggio 2015 : 15:24:55  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ftoresearch Invia a Ftoresearch un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao, hai risolto il tuo problema?Volevo chiederti, come fai a costruire la curva standard?O meglio, come calcoli le copie di DNA da mettere in relazione con il Cq?Grazie
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Daniele430
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6 Messaggi

Inserito il - 21 maggio 2015 : 14:27:00  Mostra Profilo Invia a Daniele430 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao nessuno mi ha risposto così mi sono messo a studiare. Per risponderti se devi fare una semi-quantitativa la curva standard è praticamente inutile, infatti procedi con la PCR e successivamente normalizzi con il gene housekeeping che hai deciso di utilizzare. Al contrario se devi fare una quantitativa devi assolutamente fare una curva che ti costruisci sapendo esattamente la conc che hai dentro i tuoi standard.
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Ftoresearch
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8 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2015 : 12:36:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ftoresearch Invia a Ftoresearch un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Si, ma come fai a sapere la concentrazione esatta dei tuoi standard?Fai una quantificazione dell'assorbanza a 260 nm?Che poi se non sbaglio, occorre conoscere le copie/microlitro, valore che appunto non ho capito come calcolare, visto che una misura spettrofotometrica ti da solamente un valore di concentrazione del tipo ng/microlitro.
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Daniele430
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6 Messaggi

Inserito il - 23 maggio 2015 : 08:45:58  Mostra Profilo Invia a Daniele430 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Per non farla troppo lunga e magari confonderti le idee di do il link di una guida fatta dalla biorad dove spiega bene tutto

http://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_5279.pdf
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Ftoresearch
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8 Messaggi

Inserito il - 25 maggio 2015 : 09:00:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ftoresearch Invia a Ftoresearch un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Va bene, grazie.
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