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Crostina
Nuovo Arrivato
Città: Roma
4 Messaggi |
 Inserito il - 09 giugno 2008 : 19:29:03
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ciao ragazzi!!!!!
io ho più di una domandina da porvi ...se mi potete dire dove posso trovare le risposte vi ringrazio tantissimo!!!
1)come posso calcolare il titolo delle placche PFU/ml avenvo il numero medio di particelle infettanti per piastra??
2)MOI(molteplicità media di infezione)di preciso che cosa è? Come si calcola?
3)Trascrizione Virale...in particolare di RNA(+):Picornaviridae e Togaviridae; RNA(-):Rhabdoviridae; Retrovirus...insoma come lo producono l'RNA??
So che sono tante domande...ma sono disperata!!!
grazie in anticipo a tutti!
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e non c'è niente di vero tranne il mare, il vecchio sa, perchè ora il vecchio è il mare! |
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SerenaS
Utente Junior
211 Messaggi |
Inserito il - 09 giugno 2008 : 20:03:55
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Ciao,
io ti posso solo dire che la risposta alla domanda 3 la puoi trovare sull'Alberts dove quell'argomento è fatto veramente bene
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SII IL LUSSO DI TE STESSO |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 09 giugno 2008 : 22:17:43
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La definizione di MOI la trovi su Wiki. E' il rapporto tra il numero di agenti infettanti (es. virus) e il target di infezione (es. linea cellulare da trasdurre). Dal punto di vista pratico potrebbe essere il numero di particelle virali depositate in un pozzetto diviso per il numero di cellule da infettare che sono state messe in quel pozzetto. Il fatto è che una cellula può essere infettata da piò di una particella virale, un'altra da nessuna, quindi si deve fare un calcolo probabilistico tramite una distribuzione di Poisson per trovare la probabilità che una cellula assorba n virus utilizzando una MOI di m
P(n) = (m^n x e^{-m))/n!
dove m è la MOI, n il numero di particelle virali che entrano nel target d'infezione, P(n) la probabilità che la cellula venga infettata da n virus
es. applicando la formula se usiamo una MOI di 1 (= 1 virus per cellula)la probabilità che una cellula non venga infettata è P(0)= 36,79% ed è la stessa probabilità che venga infettata da UNA sola particella. Che sia infettata da 2 partifcelle è P(2)= 18.39%, da 3 è P(3) = 6.13%, ecc
http://en.wikipedia.org/wiki/Multiplicity_of_infection
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Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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Giuliano652
Moderatore
Prov.: Brescia
6940 Messaggi |
Inserito il - 09 giugno 2008 : 22:49:58
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la_fra come la fai complicata! E' esatto al centimetro quello che dici, ma per l'uso normale di laboratorio per MOI si intende il numero di virioni che infetta una cellula, e si calcola molto semplicemente come numero di virioni con cui si infetta/numero di cellule in coltura.
Ovviamente devi sapere quanto virus metti e quante cellule hai nella piastra, e comunque in genere ci si accontenta di sapere quanti virus "potrebbero" infettare ogni cellula, non quanti effettivamente l'abbiano fatto. Insomma, se metti 5 virus per cellula, indipendentemente dai calcoli statistici, hai usato una MOI di 5.
Per le altre due domande:
1) ti rimando alla lettura del protocollo, che spiega anche come si calcolano le placche: http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=50
3) molto banalmente, con una RNA polimerasi! La differenza è che i virus con RNA+ possono funzionare anche da messaggeri, ma sintetizzano un RNA- che poi farà da stampo al nuovo RNA+ con un intermedio a doppio filamento di RNA. I virus a RNA- invece non funzionano da messaggeri, quindi comunque trascrivono RNA+ per fare i messaggeri, inoltre trascrivono un RNA+ completo che farà da stampo al nuovo RNA-
I retrovirus sono una cosa a parte, hanno RNA+ che trascrive DNA che si integra nel DNA cellulare e che codifica RNA+. Se vuoi qualcosa di più approfondito, comunque, ti consiglio anche di cercare nel forum, perché le risposte a questi quesiti sono già stati dati. |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 10 giugno 2008 : 13:44:37
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| si bè infatti è quello che ho detto nelle prime due righe ma dato che poi c'è sempre chi fa il puntiglioso ho messo tutto il blabla |
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Crostina
Nuovo Arrivato
Città: Roma
4 Messaggi |
 Inserito il - 10 giugno 2008 : 19:15:43
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GRAZIEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEE!!!!!!!! |
e non c'è niente di vero tranne il mare, il vecchio sa, perchè ora il vecchio è il mare! |
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