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elisadoc
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 29 settembre 2011 : 16:27:12

Ciao a tutti! é la mia prima volta qui su MolecularLab e già cerco il vostro aiuto! Sto eseguendo per la prima volta una marcatura diretta di una sonda in un esperimento di FISH, mentre di solito uso una reazione di nick translation con incorporazione di dUTPs marcati con DIG o BIO. I dubbi mi sono sorti al momento della risospensione della sonda nel tampone di ibridazione, dopo la precipitazione della stessa con sodio acetato e etanolo freddo (e l'aggiunta di 10x di salmon sperm DNA). Ebbene la miscela risultava quasi sabbiosa, e non limpida come sono abituata a vederla. A qualcuno è già successo? A cosa può essere dovuto? So che non è propriamente "normale" per la marcatura diretta, perchè mi è capitato di vedere altre volte sonde risospese e non avevano questo aspetto...Grazie!!

elisadoc
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 30 settembre 2011 : 15:22:58

Dato che non avevo altra scelta ho comunque ibridato con la mia sonda sabbiosetta e incredibile la FISH ha funzionato ugualmente, anche se c'era un alto livello di background.. ancora mi interrogo sul perchè della sabbiosità...potrebbero essere cristalli di sale? Ho usato sodio acetato 3M a pH 5...