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tukio
Nuovo Arrivato



3 Messaggi

Inserito il - 09 gennaio 2014 : 16:13:51  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di tukio Invia a tukio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao ragazzi

Studiando per l'esame di Biologia molecolare mi sono imbattuto in una domanda del prof : " come disegnare un vettore shuttle per le cellule di mammifero"

C'č una buon'anima di voi che mi aiuta :):)

Iside
Utente Attivo

Iside_paradise

Cittā: Napoli


1375 Messaggi

Inserito il - 10 gennaio 2014 : 10:46:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Iside  Invia a Iside un messaggio Yahoo! Invia a Iside un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
comincerei a chiedermi cosa č necessario all'interno di un vettore per funzionare in cellule di mammifero...quali sono le caratteristiche di questo tipo di vettori?

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Biotech_is_PNA
Utente Junior


Cittā: Parma


123 Messaggi

Inserito il - 21 gennaio 2014 : 15:08:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotech_is_PNA Invia a Biotech_is_PNA un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Provo a rispondere anche se č tanto che non ho a che fare con la biologia molecolare.

Dovresti avere un'origine di replicazione procariotica per ingegnerizzare e arricchire in copy number.
Dovresti avere un selettore positivo (tipo amp+) per selezionare i procarioti che hanno acquisito il vettore.
Semini i procarioti trasformati. Le colonie che hanno ricevuto il vettore col transgene (e non il vettore vuoto) vengono individuate facendo delle restrizioni di controllo, per cui non ti serve un altro selettore procariotico.
Il promotore del transgene deve essere eucariotico e tra le altre cose dovrebbe contenere la seq. di Kozak. Il transgene, se non modifica lui direttamente il fenotipo degli eucarioti, dovrebbe contenere un selettore eucariotico, magari espresso tramite IRES.
A seconda del tipo di organismo a cui il vettore navetta č destinato, č necessaria una appropriata origine di replicazione (eucariotica) e probabilmente sequenze "stabilizzatrici" (gli eucarioti non hanno plasmidi o ne hanno pochi, per cui bisogna ingannare la cellula prendendo accorgimenti particolari a seconda dell'organismo per fargli mantenere il plasmide, facendogli credere che sia un cromosoma oppure scopiazzando le strategie dei virus).

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