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ru
Nuovo Arrivato

14 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2016 : 14:37:43

Salve a tutti,
ho una domanda riguardo la fase di ligation durante il cloning dell'inserto nel vector.
Il protocollo che ho dice:
xul digested vector (50ng)
1ul oligo duplex diluted
5ul 2x quick ligase buffer
xul Acqua
subtotale: 10ul

1ul Quick Ligase
totale: 11ul

Fin qui tutto ok... ma il mio problema � che del vettore per avere 50 ng devo aggiungere 10ul e quindi arrivo immediatamente al subtotale senza poter aggiungere gli altri reagenti.
Come posso ovviare a questo problema?
Grazie a chiunque sapr� darmi un consiglio.

Saluti
Roberto

l�
Utente Junior

565 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2016 : 16:49:45

Io sforerei il totale di reazione del protocollo, e lo dico perch� ho fatto ligazioni anche da 30ul senza alcun problema. Ti consiglio di incubare la reazione a 15�C nel termociclatore.

ru
Nuovo Arrivato

14 Messaggi

Inserito il - 16 giugno 2016 : 16:35:53

ok grazie mille prover� cosi!